抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析.pdf

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1、苗平等抗人印130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析第12期·l119·doi：10．3969／j．issn．1000—484X．2011．12．16·会议优秀论文选登·抗人gpl30单克隆抗体的制备及其生物学特性分析①苗平钱柳赵蓉余奇文张继英陈雪华②陆梅生③张冬青(上海交通大学医学院上海市免疫学研究所，上海200025)中国图书分类号R392文献标识码A文章编号1000-484X(2011)12．1119．05[摘要]目的：制备小鼠抗人11,6邸(gpl30)单克隆抗体，并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法：用gpl30抗原免疫BALB／c小鼠，经三次免疫获得高效

2、价的ELISA结果后，取小鼠的脾细胞和SP2／O骨髓瘤细胞进行融合，经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gpl30单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞，收集细胞上清，随即过亲合层析柱进行纯化，对经纯化的抗人gpl30单克隆抗体进行亚型鉴定，用Westernblot及问接ELISA、biacore方法分析抗人gpl3o单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力，用FACS术检测抗人gpl30单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率，同时建立I1,6诱导的15266细胞增殖系统，用以检测和分析抗人gpl30单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果：本研究获得了多株能够稳定分

3、泌抗人gpl30单克隆抗体的细胞株，取其中一株(14C4)进行分析，表明其亚型属于IgG2b，轻链为链，经Westemblot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性，biacore结果显示14CA与抗原结合的亲和力为2．62E一10，FACS结果证实能与U266细胞表面的gpl30特异性结合，并且呈剂量依赖性，细胞增殖实验说明14CA在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论：初步成功制备了抗gpl30单克隆抗体，并且具备较好的生物学特性，为研究人IL-6gpl30在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。[

4、关键词]11,6；gpl30；单克隆抗体；特异性；亲和力Preparationofthemonoclonalantibodyagainsthumangpl30andanalysisforitsbi—ologicaltraitsMIAO，lg，QIANLiu，ZHAO舶，YUQi—Wen，ZHANGJi—Ying，CHENXue—Hua，LUMei—Sheng，ZHANGDong-Qing．ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine，ShanghaiInstituteofImmunology，Shanghai200025，China

5、[AbstractJObjeelive：Toprepareanti—humangpl30monoclonalantibodies，andpreliminaryanalysisoftheirbiologicalcharacteristicsandfunctions．Methods：ImmunizedtheBALB／cmicewithgpl30，thenfusionthespleencelsoftheBALB／cmiceandtheSP2／0cels，cul—turedinHATscreenedmedium，afterseveralsubclone，harvestedseve

6、ralhybridomacelllinessecretinganti—gpl30monoclonalantibody．Collect—edthesupematantforaf1％itypurification，usingWesternblot，indirectELISAandbiacoretoanalyzethepurity，specificityandafinityofanti—bodies，observedthecombinationofantibodywithU266celsbyFACS，andasessedtheproliferationinhibitoryefe

7、ctsonU266cellundercondJ—tionsofII．6existence．Results：Severalantihumanmonoclonalantibodiesonlyagainstgpl30wereharvested，selectoneofthese(14C4)forthefollowingstudy，thesubtypesbelongedtoIgG2b，lightchain，WesternblotandindirectELISAdemonstratedthatithadahigherpurityandsp