流式细胞术的临床应用.pdf

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1、医技杂志2010年12月第17卷第l2期JournalofPracticalMedicalTechniques,December2010,Vo1．17,No．12·l137·流式细胞术的临床应用江苏省扬州东方医院(225000)刘定山流式细胞术(riowcvtometry，FCM)是近代细胞生物学、分细胞集落刺激因子(GCSF)动员的外周血(MPB)造血干细胞子生物学、分子免疫学单克隆抗体技术与激光技术、电子计(HSC)作细胞周期分析。Heitger等脚的1例同种异体骨髓移植算机技术等高度结合和发展的结晶。它不仅快速、灵敏和准患者，术后用FCM测定CD4+细胞／CD45RA+细胞(代表重

2、建确，而且还具有客观、直接和同时进行多参数检测的优点。随的幼稚T辅助细胞)，移植后24个月时的比值为0．11。着新的荧光物质不断发现及计算机功能在数据存储、显示分4应用FCM检测抗核抗体析等方面的日益完善，FCM已广泛用于细胞生物学、免疫学、邢艳等[91收集经间接免疫荧光法(IFA)检测的阴性血清肿瘤学、遗传学、病理学及临床检验各领域。现将FCM在临床26例，阳性血清39例作为检测对象。体外培养人宫颈癌细胞上的研究应用归纳如下。系Hela细胞，收集对数生长期的细胞，用细胞核抽提液提取1用于检测癌前病变和协助肿瘤早期诊断Hela细胞核，4％多聚甲醛固定2Omin后，采用皂素对核膜打当人体发

3、生癌变及一些具有恶性潜能的癌前病变，在其孔，加人1：100的稀释血清，37℃孵育60nin，用含1％胎牛发生、发展的过程中可伴随细胞DNA含量的异常改变，而血清的磷酸盐缓冲液(PBS)充分洗涤，加人异硫氰酸荧光素FCM可精确检测DNA含量的改变，不但可以定量癌前细胞标记的兔抗人抗体，室温避光反应20rain，PBS洗涤1次，取DNA含量，还可根据DNA分布组方图直观反映细胞周期的免疫反应后的细胞核涂片，用Olympus-BX51型荧光显微镜分布状态，对癌前病变细胞的增殖能力进行动态观察，可作观察细胞形态核着色情况，然后用FCM测定，将荧光强度大为诊断癌前病变的一个有价值的标志。齐凤英等⋯

4、对经病理于所设门内细胞总数的5％的标本定为阳性。显微镜下观察诊断证实癌前病变(不典型增生)的石蜡包埋组织进行DNA见细胞核形态完整，细胞碎片少，荧光核型与间接荧光抗体试倍体分析，其中29例异倍体的癌前病变有随访结果，22例在验(IFA)近似。FCM检侧结果为阳性40例，阴性25例，其中2随访期间已由病理诊断证实为癌变，7例未发生癌变；研究者例IFA阳性的标本FCM检测结果为阴性(有1例是胞质型)，还对30例二倍体的Ⅲ级不典型增生病变进行了随访，在随1例IFA阴性的标本FCM检测结果为阳性，2种方法具有高访期间无一例癌变。由此可见，FCM能对癌前病变盼眭质和度的一致性(火0．01)。发展趋

5、势作出评价，有助于癌变的早期诊断。5用于抗精子抗体(AsAb)的检测2FCM用于交叉配型(FCXM)血清中AsAb主要为IgG和IgM型AsAb，而精浆中主要Garovov等【和1waki等『3l建立本法后，经不断完善，已被为I型，亦可见IgG和I型㈣。AsAb可通过妨碍精子正常广泛采用。目前常规步骤是：分离供者的淋巴细胞(3x105发生、干扰精子获能和顶体反应、凝集和制动精子、影响精卵个)，加入受者血清5Ol，37保温30min，用含叠氮钠的磷结合、干扰胚胎着床和影响胚胎存活等多种机制使男性生育酸盐缓冲液(PBS—Az)洗2遍，加入25l用异硫氰酸荧光素力下降。AsAb的检测方法包括试

6、管一玻片凝集试验、混合抗球(FITC)标记的羊抗人免疫球蛋白抗体[IgGF(ab)：]，置4℃蛋白反应试验(MAR)、免疫珠试验(IBT)、固相酶染色法、浅30min(避光)，洗2遍后用PBS—Az复悬至200Ixl，用流式盘凝集试验(TAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)法、FCM法细胞仪测定。以未加受血清者(仅有T淋巴细胞与FITC标等。Ke等⋯1研究发现FCM检出同种Ig型的敏感性分别为：记物)为阴性对照，荧光道数(强度)大于对照组2s者为阳IgG100％，IGA86％，IgM100％；特异性均为100％。FCM还能性。诸多文献证实，FCXM比标准的补体依赖性淋巴细胞毒试检测Ig

7、G、IgA型AsAh的比例，检测每条精子表面AsAb的分验(CDC)检测更为敏感，它不仅能检出CDC未能检出的弱子数量以及表面抗体阳性精子所占的百分率。阳性结果，而且可在术后早于CDC检出抗体。因此，它不仅可6在血栓与止血中的应用用于移植手术前的配型，还可用于术后预报移植物排斥。血小板活化时其质膜蛋白较其静止期发生显著改变，Abe等151发现肾移植后发生慢性排斥者其抗供者抗体的阳性FCM可以通过单抗免疫荧光标记(血小板膜糖蛋白Ⅱb／