基质细胞衍生因子-1及其受体 CXCR4对膀胱癌细胞侵袭能力及腔内种植的影响.pdf

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1、·1028·医学研究生学报2014年10月第27卷第10期JMedPostgra，Vo1．27，No．10，October，2014论著(基础研究)基质细胞衍生因子一1及其受体CXCR4对膀胱癌细胞侵袭能力及腔内种植的影响杨德林，霍倩，王乙水，杨旭升，王凯，Y-~'I松，徐鸿毅，王海峰[摘要】目的复发和转移是膀胱癌治疗失败的主要原因。文中利用RNA干扰技术使趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默，探讨其沉默对膀胱癌细胞侵袭能力及腔内种植的影响。方法设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(shorthair

2、pin，shRNA)，筛选出能够稳定抑制CXCR4表达的细胞，并分为空白对照组、阴性对照质粒组、pshRNA—CXCR4—1实验组，pshRNA—CXCR4—2实验组，应用RT—PCR和免疫荧光分别检测CXCR4mRNA和蛋白表达水平，应用Boyden小室模型检测体外侵袭能力的变化。将20只裸小鼠随机数表法分为实验裸小鼠和对照裸小鼠，各10只。向实验裸小鼠膀胱内注入100IxLShRNA-EJ—M3，向对照裸小鼠膀胱内注入100EJ—M3细胞，检测shRNA—CXCR4对膀胱癌细胞腔内种植能力的影响。结果

3、稳定转染后的pshRNA—CXCR4．1实验组CXCR4mRNA表达(62．05±1．35)较空白对照组(174．38±1．96)和阴性对照组(166．27±1．82)明显下降(P<0．05)，pshRNA—CXCR4-2实验组CXCR4mRNA表达水平(182．58±4．2)与空白对照组和阴性对照组比较，差异无统计学意义(P>0．05)；免疫荧光实验中pshRNA—CXCR4—1实验组红色免疫荧光细胞数(32．24±2．23)较空白对照组(89．61±4．47)和阴性对照组(92．45±3．68)降低(

4、P<0．05)；pshRNA—CXCR4—2实验组红色免疫荧光细胞数(76．874-5．11)与空白对照组和阴性对照组比较，差异无统计学意义(P>0．05)。体外趋化侵袭实验结果显示，pshRNA—CXCR4—1实验组穿膜细胞数(39．67±8．45)明显少于空白对照组(135．334-9．28)及阴性对照组(123．63-4-6．36)，差异有统计学意义(P<0．05)。实验裸小鼠腔内种植能力与对照裸小鼠比较，差异有统计学意义(10％70％，P<0．01)。结论以CXCR4为靶向的特异性shRNA能有效

5、抑制膀胱癌细胞基因CXCR4的表达，显著降低膀胱癌细胞体外侵袭能力及腔内种植能力，SDF一1／CXCR4生物轴有望成为预防和治疗膀胱癌侵袭和转移的重要靶点之一。[关键词】CXCR4基因；短发卡状RNA；膀胱癌；侵袭【中图分类号】R737．14[文献标志码]A【文章编号】1008—8199(2014)10—1028-05Efectofchemokinestromalcell-derivedfactor·1anditsreceptorCXCR4oninvasioncapacityandintrah-minal

6、implantationofhumanbladdercancercellsYANGDe-lin，HUOQian，WANGYi—shui，YANGXu·sheng，WANGKai，WANGJian—song，XUHong—yi，WANGHai—feng(DepartmentofUrinarySurgery，theSecondAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity，YunnanInstituteofUrology，Kunming650101，Yunnan，Ch

7、ina)[Abstract]objectiveBladdercancer，whichhasahighrateofrecurrenceandinvasion，isthemostcommongenitourinarycancer．ThearticlewastostudytheeffectofspecificchemokinereceptorCXCR4oninvasioncapacityandintraluminalimplantationofhumanbladdercancercells．MethodsACX

8、CR4specificrecombinantplasmidvector(shorthairpin．shRNA)wasconstructedtoselectthosecellswhichcouldinhibittheexpressionofCXCR4．andthesecellsweredividedintoblankcontrolgroup．negativecontrolplasmidgroupandrecombinantpla