神经酰胺通过JNK-c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡.pdf

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1、2015正4月首都医科大学学报Apr．2015第36卷第2期JournalofCapitalMedicalUniversityVo1．36No．2[doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2015．02．020]·基础研究·神经酰胺通过JNK．C-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡张露勇罗菲亚胡培丽单纯张淼(1．中国食品药品检定研究院食品化妆品所，北京100044；2．解放军总医院药品保障中心外科药房，北京100853)【摘要】目的探讨神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6自噬性死亡的影响及其作

2、用机制。方法不同浓度神经酰胺作用于c6细胞后，用MTF法检测细胞的存活率，流式法检测细胞凋亡的改变；Westernblotting及电镜的方法观察细胞自噬水平的改变，以及JNK及其下游靶分子c—Jun的磷酸化水平变化；最后进一步借助JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性，观察其对神经酰胺诱导的细胞自噬情况的影响。结果与对照组相比，神经酰胺作用24h后，C6细胞存活率明显降低，且具有剂量依赖性，差异有统计学意义(P<0．05)；与对照组相比，神经酰胺作用24h后，c6细胞死亡明显升高且具有剂量依赖性

3、，差异有统计学意义(P<0．05)，但其中凋亡性死亡比例较低；神经酰胺作用后细胞内自噬小体数目，LC3B／LC3A的比值，Beclin．1的表达水平，以及JNK和c—Jun磷酸化水平都显著升高，差异具有统计学意义(P<0．05)；提前给予JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性后，显著阻断神经酰胺诱导的细胞自噬。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞c6发生自噬性死亡，其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与激活JNK信号通路有关。【关键词】胶质瘤；神经酰胺；自噬性死亡；JNK信号通路【中图分类号】R739．41

4、CeramideinducesautophagiccelldeathingliomacellthroughJNK—C-JunpathwayZhangLuyong，LuoFeiya，HuPeili，ShanChun，ZhangMiao(1．NationalInstitutesforFoodandDrugControl，InstituteforFoodandCosmeticsControl，Beijing100044，China；2．Departmentq厂PharmaceuticalCare，ChinesePL

5、AGeneralHospital，Beijing100853，China)【Abstract】ObjectiveToobservetheautophagyofgliomacellinducedbyceramideandexplorethepossiblemechanism．MethodsTheviabilityofC6cellswasmeasuredbyMTTassay．Thecellapoptosiswasassayedbyflowcytometry．Autophagic—relatedproteinexp

6、ressionsofLC3B／LC3AandBeclin一1weredeterminedbyWesternblotting．ThelevelofJNK-e—JuninducedbyeeramidewasmeasuredbyWesternblottingwithorwithoutthetreatmentofJNKspecificinhibitorSP600125．ResultsAftertreatmentofceramidefor24hours，thegrowthofC6cellsweresignificant

7、lyinhibitedindose．dependentmanner(P<0．05)：andceramideincreasedautophagiccelldeathalsoindose-dependentmanner(P<0．05)．Comparedwiththecontrolgroup，thelevelsofLC3B／LC3AandBeclin-1weresignificantlyincreasedinceramidetreatmentgroup(P<0．05)．JNKwasactivatedintheC6c

8、ellsexposedtoceramideandthephosphorylationofc—Junalsoincreased．Thisactivationofautophagycouldbereversedbythepre—treatmentofSP600125．ConclusionCeramidemayinduceautophagyingliomacellandthemechanismmayber