鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定.pdf

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1、l208ISSN1007—8738细胞LJj分子免疫学杂忐(ChinJCellMolImmunol·论著·文章编号：1007—8738(2011)11—1208—04鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定周莹，陈永井，白利雄，朱耿超，王雪峰，张学光(苏州大学医学部医学生物技术研究所，江苏苏州215007)Preparationandcharacterizati0n0f用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，以L929／PD—L1细胞为抗体筛选细胞，L929／mock细胞为对照细胞，经选择性threenovelmonoclona

2、lantibodiesa．克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析，筛选稳定和持久分泌gainsthumanPD-L1鼠抗人PD—L1mAb的杂交瘤细胞株；采用Ig亚型快速定性试纸法、Westernblot、间接免疫荧光法和竞争结合抑制实验等ZHOUYing，CHENYong-jing，BAILi—xiong，ZHU方法对mAb进行生物学特性鉴定；继而体外实验分析mAbGeng—chao，WANGXue-feng，ZHANGXue—guang对T细胞增殖的影响。结果：成功获得3株鼠抗人PD—L1InstituteofMedicalBiotechn

3、ologySoochowUniversity，SuzhoumAb，分别命名为11G8，2G5和5C3；对其生物学功能的研究215007，China结果显示，3株mAb均能识别活化T细胞表面PDL1分子，和在体外显著促进T细胞的增殖。结论：获得的3株鼠抗人[Abstract]AIM：Toprepareafunctionalmouseanti．PD—LI功能性mAb，通过阻断PD．I／PD—L1抑制途径能够有效humanPD—L1monoclonaIantibodyandtocharacterizeits增强T细胞体外增殖，这为进一步研究PD1／

4、PD—LI信号通biologicalactivities．METHODS：AstablehumanPD—L1路提供了物质基础。transfectedcelIlineL929／PD-L1wasusedasanantigento[关键词]协同刺激分子；PD—L1；单克隆抗体；T细胞lmmunizeBALB／cmice．Bymeansofthecelffusiontech．[中图分类号]R392．11[文献标识码]Anique，multiplecellsubcloning，repeatedscreeningwithL929／PD-L1astarge

5、tcellsandtheL929／mockcelsusedBretscher和Cohn¨在T细胞活化双信号模型的asthenegativecontrol，thehybridomasspecificalysecre—基础上提出“协同刺激信号”，如果缺少协同刺激分tingmouseanti··PD-·L1monoclonalantibodiesweregenera—子提供的第2信号，将会导致T细胞的无反应性或ted．ThenitsbiologicalcharacterizationwasinvestigatedbyrapidmurineIg—su

6、bclasstyping，Westernblotting，indirect特异性免疫耐受甚至凋亡。正性和负性协同刺激信immuneofIuoresceneassay．mutuaIcompetitiveinhibition号的调节及两者之问的平衡在机体免疫应答的整个test．BymeansofM1_rincorporationassay．detectedthe过程中发挥着重要的调节作用。infectionofmAbtoTcellproliferation．Threemouseanti—hu—PD一1／PD—L1是一对重要的负性协同刺激分子。ma

7、nPD—L1monoclonalantibodiesweregenerated．named人PD—L1基因定位在染色体9p24．2，编码290个氨as11G8，2G5and5C3．RESULTS：Theresultsofcharac．基酸残基的I型跨膜蛋白。PD一1／PD．L信号对淋terizationstudyshowedthatthemonoclonaIantibodiescould巴细胞的增殖发挥负性调控功能，可防止过度的免recognizethePD-L1ontheactiviatedTcells．ThemAbs疫损伤及自身免疫性疾病

8、的发生，有利于维持机体couldpromoteTcellsproliferation．CONCLUSION：Itisevi—的免疫自稳。PD—L1组成性表达于单核／