小麦矮缩病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗体制备及应用.pdf

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1、植物病理学报ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA43(4):362-367(2013)小麦矮缩病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗体制备及应用王亚娇,任堂雨,刘艳h,王锡锋(中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193。福建农林大学植物病毒研究所,福建省植物病毒学重点实验室,福州350002)摘要:小麦矮缩病毒(Wheatdwa矿virus,WDV)引起的小麦矮缩病是近年来我国小麦生产中的一种重要病毒病害,急需研发快速精准的检测技术用于预测预报和病毒一介体相互作用的研究。本研究应用Gateway重组技术构建了外壳蛋白基因(

2、Coatprotein,CP)的原核表达载体,将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导获得CP基因原核表达蛋白。以重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备得到了相应的抗体,Westernblot检测表明制备的抗体能与CP重组蛋白、感病小麦和带毒叶蝉特异性结合,说明获得的抗体特异性高。用获得的抗体进行免疫荧光标记,观察到病毒分布在介体叶蝉的前中肠和中中肠部位,为WDV的预测预报和介体条沙叶蝉传毒机制的研究奠定了基础。关键词:小麦矮缩病毒;原核表达;多克隆抗体;Westernblot;免疫荧光标记AntiserumpreparationofWheatdwarf

3、virususingcoatproteinexpressedinEsche—richiacolianditsapplicationWANGYa-jiao,RENTang.Yu,LIUYan,wANGXi—feng(StateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests,InstituteofPlantProtection,ChineseAcademyofAgri—culturalSciences,Beijing100193,China;InstituteofPlantVirology,FujianProvi

4、nceKeyLaboratoryofPlantVirology,Fu—jianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002,China)Abstract:Wheatdwarfvirus(WDV)hasseverelyaffectedwheatproductioninChinainrecentlyyears.Itisurgenttodevelopaccuratedetectiontechnologiesfordiseaseforcastandresearchesoninteractionbetweenvirusandvec

5、tor.Inthisstudy,theexpressionplasmidsofWDVCPgenewereconstructedbythetechnologyofGatewayandthentransformedintoE.colistrainRosetta.RecombinantproteinwasobtainedthroughIPTGinduction.Therecombinantproteinwasusedtoimmunizerabbitsforpreparationofpolyclonalantibodies.TheanalysisofWesternblott

6、ingindicatedthatthepreparedantibodiescouldspeciallybindingwithrecombinedCPprotein,wheatplantandleafhopperinfectedbyWDVrespectively.ItwasobservedthatWDVdistributedintheanteriorandmiddlemidgutoftheleafhoppervectorbyimmunofluorescence.Theresultcanprovidesup—portforthestudyofpredictionandt

7、hemechanismoftransmission.Keywords:Wheatdwarfvirus;prokaryoticexpression;polyclonalantibody;Westernblot;immunofluores—CenCe中图分类号:S432.41文献标识码:A文章编号:0412-0914(2013)04-0362-06小麦矮缩病毒(Wheatdwarfvirus,WDV)是联体病毒,是严重危害世界各地小麦产量的主要病联体病毒科玉米线条病毒属的成员,属于第1亚组毒之一1J。WDV为孪生颗粒形态的植物病毒,颗收稿日期:2013-0l-03;

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