消减免疫法制备抗HL60、HL60／ADR表面抗原差异抗体.pdf

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1、中国免疫学杂志2010年第26卷·免疫学技术与方法·消减免疫法制备抗HL60、HL60／ADR表面抗原差异抗体①任思楣俞云②佘鸣邵晓枫师锐赞彭洪薇林阳张秀丽张砚君熊冬生(中国医学科学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室，天津300020)中国图书分类号R392．33文献标识码A文章编号1000．484X(2010)02-0160-04[摘要]目的：建立可特异识别Hlfa0和HLf0／ADR细胞膜表面差异蛋白的抗体库，制备单克隆抗体并研究其生物学活性。方法：通过cp诱导的消减免疫法免疫BALB／c小鼠，采用传统杂交瘤技术制备可特异识别两种细胞差异膜蛋白的单

2、克隆抗体；采用FACS和激光共聚焦显微镜鉴定其和两种靶细胞结合的特异性和差异性。结果：获得5l株候选的差异抗体，成功筛选并纯化其中一株单抗(5Fb)。5F6与可特异稳定的识别HI／30／ADR细胞，结合率扣除本底为68．2％，而该抗体与HL60细胞的结合率为17％。结论：sI结合差异筛选的方法是制备差异抗体便捷可行的方法，所获得的单克隆抗体与HIB)和HIfa0／ADR细胞膜蛋白结合有特异性和差异性，实验中所获得的单抗是寻找肿瘤耐药的新靶点和发现肿瘤耐药新机制的工具，为研究这些问题开拓r新思路。[关键词]?肖减免疫；肿瘤耐药；单克隆抗体；差异识别Production

3、ofdiscrepantmonoclonalantibodyagainstHL60andHL60／ADRbySItechniqueRENSi—Mei，YUYun，SHEng，SHAOXiao—Feng，SHIRui—Zan，PENGHong-Wei，HNYang，ZHANGXiu—Li，ZHANGYan—Jun，XIONGDong-Sheng．StateKeyLaboratoryofExperimentalHematology，InstituteofHematology，CAMS&PUMC，Tianjin300020，China[Abstract]Objective

4、：Toprepareandcharacterizespecificanddiscrepantnlousehybridomaantibodiesonmembraneofm加andHL60／ADRcellines．Methods：BALB／cmicewereimmunizedbysubtractiveimmunizationinducedCp(Cyclophosphamide)．McAbswerepre—paredbyhybridomatechnique，screenedanddetectedbyFACSandLSCM．Results：51candidatesanddi

5、screpantantibodieswerefound，andoneofthem(5F6)waspurifiedandidentifed．Conclusion：CombinationofS1withdiscrepantscreeningmethodshouldfacilitatethepreparingandidentifyingdiscrepantMcAbsforidentifyingantibodiesthatCandistinguishthediferencesinproteinsexpressedinHL60andHL60／ADR，whichisasigni

6、fcativeandpotentialmethodintheresearchandtargettherapyassociateddmg-resistance．[Keywords]Sul~tractiveimmunization；Tmnordragresistance；McAb；Discrepantprotein肿瘤耐药是肿瘤治疗中的难题，也是目前国内单克隆抗体，为肿瘤多药耐药新靶点和新机制的发外医学界研究的热点。目前已经发现的耐药机制主现奠定了基础。要有：P一糖蛋白，多药耐药相关蛋白，包括拓扑异构1材料与方法酶、二氢叶酸还原酶、醛脱氢酶等酶类以及和凋亡相关的一些蛋白

7、等等，其中能在临床上得到证实甚至1．1材料应用的却很少，因而发现新的耐药机制和耐药新靶1．1．1实验动物和细胞系小鼠SP2／0骨髓瘤细点迫在眉睫。本实验采用消减免疫方法，获得了数胞、HI60细胞系，耐阿霉素人急性白血病细胞系株可特异识别敏感肿瘤和耐药肿瘤表面差异蛋白的(HI~o0／ADR)，耐药倍数为130倍，均由本室保存；BALB／c小鼠(4～6周龄)，购自中国军事医学科学院。①本文受国家自然科学荩金(30873091、30971291)和天津市科技发展1．1．2实验试剂RPMI1640(HyCLIONEPIERCE)、项目(05YFGZGX0280008ZC