葡萄抗病相关基因VvIPK2的克隆、序列分析及表达.pdf

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1、江苏农业学报(JiangsuofAgr．Sci．)，2014，30(4)：738～745738http：／／www．jsnyxb．cOm王西成，吴伟民，赵密珍，等．葡萄抗病相关基因的克隆、序列分析及表达[J]．江苏农业学报，2014，30(4)：738—745．doi：10．3969／j．issn．1000-4440．2014．04．008葡萄抗病相关基因WlPK2的克隆、序列分析及表达王西成，吴伟民，赵密珍，钱亚明，王壮伟(江苏省农业科学院园艺研究所，江苏南京210014)摘要：以金星无核葡萄叶片为试验材料，采用RT—PCR结合RACE技术克隆得到IPK2同源基因全长cDNA序

2、列，命名为VvlPK2(GenBank登录号：KF752483)，全长1853bp，含有1个918bp的开放阅读框，编码305个氨基酸，预测VvlPK2蛋白质分子量为3．421×10，理论等电点为5．38。系统进化分析表明，Vv／PK2编码的氨基酸序列与拟南芥、盐芥、大豆和菜豆的一致性分别为65．23％、63．56％、54．84％和52．18％。荧光定量RT-PCR分析结果表明，Vv／PK2在葡萄叶片和茎中的表达水平高于根和花，葡萄霜霉病菌侵染后72h内均可诱导VvlPK2基因的表达，且相对表达量均高于对照(处理0h)，说明VvIPK2基因在葡萄应答霜霉病菌侵染过程中可能发挥着重

3、要作用。关键词：葡萄；霜霉病；VvlPK2；基因克隆；表达分析中图分类号：s663．1文献标识码：A文章编号：1000-4440(2014)04-0738-08Cloning，characterizationandexpressionanalysisofVvlPK2generelatedtodownymildewresistanceingrapevineWANGXi—cheng，wUWei—min，ZHAOMi—zhen，QIANYa—ming，WANGZhuang—wei(1~tituteofHorticulture，JiangsuAcademyofAgriculturalSc

4、iences，Nanjing210014，China)Abstract：AfulllengthofIPK2generelatedtodownymildewresistancewasisolatedfromgrapevineVenusSeedlessbyRT—PCRandRACEmethodanddesignatedVvlPK2(GenBankaccessionNo．KF752483)．ThecDNAofVv／PK2is1853bpinlengthandcontainsanopenreadingflrameof918bp．ThepredictedVvlPK2proteinhas30

5、5aminoacidswithanestimatedmolecularmassof3．421xlOandanisoelectricpointof5．38．PhylogeneticanalysisshowsthatVvlPK2shares65．23％，63．56％，54．84％and52．18％similaritieswithIPK2inArabidopsisthaliana，Thellungiellahalophila，GlycineandPhaseolusvulgaris．qRT—PCRanalysisrevealsthattheexpressionsofVvlPK2genei

6、nleafandstemarehigherthanthoseinrootandflower．TheexpressionofVvlPK2genewasup-regulatedin72haftertheinoculationofPlasmoparavitico—la，andthelevelismuchhigherthanthatofthecontrol(treatedfor0h)．ItissuggestedthatVvlPK2genemayplayanim—portantroleinresponsetograpevinedownymildew．Keywords：grapevine；d

7、ownymildew；VvlPK2；genecloning；expressionanalysis收稿日期：2014-O2-08葡萄作为世界第二大水果被广泛种植和加工利基金项目：江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(12)2013]用，为人类社会的发展创造了重要的经济、生态和社作者简介：王西成(1982一)，男，安徽毫州人，博士，助理研究员，主会效益，特别是美国科学杂志报道并证明葡萄果要从事葡萄育种及分子生物学研究；(Te1)18914738162；实及其加工产品中特异功能成分白藜