沉默Gli1基因对人非小细胞肺癌A549／DDP顺铂耐药性的影响.pdf

《沉默Gli1基因对人非小细胞肺癌A549／DDP顺铂耐药性的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国免疫学杂志2014年第3O卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．08．013沉默Glil基因对人非小细胞肺癌A549／DDP顺铂耐药性的影响达丽隽李华张献全(重庆医科大学附属第二医院肿瘤科，重庆400010)中图分类号R734．2文献标志码A文章编号1000-484X(2014)08-1064-05[摘要]目的：以GlilsiRNA转染人肺腺癌耐药细胞A549／DDP，研究其对靶细胞顺铂耐药性的影响。方法：以GlilsiRNA转染A549／DDP细胞，分别从mRNA

2、和蛋白水平检测干扰效果，同时检测蛋白Bcl一2、caspase一3、cyclinD1的变化；Hoechst33258染色观察各组细胞自发性凋亡情况；流式细胞术检测细胞周期；MTI"法测定顺铂对各组细胞的半数抑制浓度(IC50)；AnnexinV—FITC法检测顺铂诱导的细胞凋亡率。结果：转染GlilsiRNA能有效抑制Glil在mRNA和蛋白水平上的表达(P=0．001)；Bel-2和cyclinD1蛋白表达水平明显下降(P=0．003)，caspase-3表达量显著升高(P=0．001)；实验组细胞

3、的自发性凋亡率高于对照组；细胞周期显示：GlilsiRNA能使更多细胞停滞在G1期；IC50值由干扰前的(12．63±1．11)Ixg／ml／(13．81±1．14)Ixg／ml下降为干扰后的(2．65+0．85)ml(P=0．ooo)；顺铂诱导的细胞凋亡率明显提高(35．19％±3．92％vs6．43％-4-0．1l％／5．01％±0．77％，P：0．000)。结论：利用RNA干扰技术能有效抑制Glil基因的表达，提高A549／DDP细胞对顺铂的敏感性。这将为逆转肺癌细胞的耐药性提供新的研究思路和作

4、用靶点。[关键词]Glil基因；肺癌；RNA干扰；顺铂耐药；凋亡ImpactsofGlilsilencingoncisplatinresistanceoflungcancercellA549／DDPDALi-Jun，LIHua，ZHANGXian—Quan．DepartmentofOncology，theSecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010，China[Abstract]Objective：Toinves

5、tigatetheroleofGlilinDDP—resistanceinlungcancer．Methods：ADDP—resistanthumanlungadenocarcinomacelllineA549／DDPwasculturedandtransfectedwithGlilsiRNA．ThemRNAandproteinexpressionlevelsofGlilwereevaluatedbyqPT-PCR，Westernblotanalysisandimmunofluorescencemic

6、roscopy．TheexpressionofBcl-2、caspases一3、cyclinD1wasevaluatedbyWesternblotanalysis．Hoechst33258stainingandflowcytometrywereusedtodetectspontaneouscellapoptosisandcellcycle．ThecellinhibitionrateandDDP．inducedcelldeathwereexaminedbyMTrandAnnexinV—FITC／prop

7、idiumiodidestaining．Results：Glil-knockdownbyusingGill·specificsiRNAledtoamarkedlydecreaseinGlilmRNAandproteinexpressionlevels，whencomparedtonegativesiRNAtransfeetedcellsanduntreatedcontrolcells(P=0．001)．ThedownstreameffectorsofGlil，Bcl-2andcyclinD1prote

8、inswerealsoinhibited(P=0．003)，theexpressionofcaspase一3wasincreased(P=0．001)．Hoechst33258stainingshowedthatGli1depletionbyGlilsiRNAinA549／DDPcellscouldinducespontaneousapoptosis．TheresultofcellcycleshowedGlilsiRNAcouldleadmoreceHs