《基因工程综合实验》思考题.pdf

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1、《基因工程综合实验》思考题实验一：植物总DNA提取1、描述植物总DNA提取的基本过程。2、植物总DNA主要包括哪些成分？3、在植物总DNA提取过程中，蛋白质、RNA及多糖等杂质的去除，常采用什么方法？5、植物总DNA提取与纯化过程中应注意事项。实验二：目的基因的PCR扩增1、什么是PCR技术？描述PCR扩增的基本过程（循环阶段）。2、PCR过程中退火时，为什么引物与模板杂交，而模板双链不复性？3、PCR扩增产物的特异性不好或产量过低，应如何调整？4、根据已知的序列设计引物。实验三：琼脂糖凝胶电泳技术1、常用的凝胶电泳技术有哪些？各有什么作用？2、阐述电泳的基本原理。3、电泳中，加入溴化已

2、锭（EB）的作用是什么？凝胶载体缓冲液（loadingbuffer）的作用是什么？4、DNA琼脂糖凝胶电泳中，常用的电泳缓冲液有哪些？各有什么特点？实验四：外源DNA片段与质粒载体的重组连接1、常用的DNA连接酶主要有哪些？2、描述T4DNA连接酶催化DNA连接反应的过程。3、根据连接片段末端类型的不同，连接方法有哪些？4、分子克隆中用的载体通常都具备什么特点？实验五：大肠杆菌感受态的制备及质粒DNA分子的导入1、质粒DNA向大肠杆菌中转化主要有哪些？2、描述Cohen方法中大肠杆菌感受态制备的基本过程。3、质粒DNA分子向大肠杆菌导入中，造成转化效率低的原因及解决办法？4、制备高感受态

3、细胞取决于哪些因素？5、感受态细胞概念。实验六：质粒DNA的提取及酶切鉴定1、质粒DNA提取，主要包括哪些基本的步骤？2、简述大肠杆菌的染色体DNA与质粒DNA之间的主要的性质差异。3、提取质粒时，细菌的培养过程中，对于拷贝数较低的质粒（如pBR322）应如何处理？为什么？4、纯化质粒DNA时，通常使用的方法利用质粒DNA哪些性质？少量制备的质粒DNA，如何纯化？5、提取的质粒DNA分子通常具有哪几种构型？有何电泳特性？6、质粒的去磷酸化在哪些情况下被推荐使用？实验七：外源基因在大肠杆菌中的表达及其检测1、简述SDS-PAGE的原理及测定的方法。2、诱导外源基因在大肠杆菌中表达的方法有哪

4、些？加入IPTG的作用是什么？3、在聚丙烯酰胺中的为什么蛋白质的迁移率仅仅取决于其分子量？4、聚丙烯酰胺凝胶电泳中，凝胶由哪几部分构成？各起到什么作用？实验八：农杆菌介导的植物基因转化1、农杆菌介导的基因转化，包括哪些基本步骤？2、在植物基因转化中，应用的农杆菌主要哪些类型？根据农杆菌染色体毒性(chv)基因不同（合成不同的冠廮碱），又分别分为哪些不同种类？3、农杆菌介导的植物基因转化中，Ti质粒作为基因转化的基因载体，主要有哪些形式？4、将双元载体导入农杆菌的方法有哪些方法？5、在农杆菌介导的基因转化中，常用的共培养介质有哪些？应如何选择？6、在农杆菌介导的基因转化中，添加的酚类物质有

5、哪些？有何作用？7、培养配置在农杆菌介导的烟草基因转化中，添加的卡那霉素和羧苄青霉素，应如何处理？为什么？8、在用农杆菌侵染植物外植体时，菌液浓度过高或高低，侵染时间过长或过短，均会造成转化效率的降低，为什么？9、描述农杆菌介导的烟草基因转化的基本步骤。实验九：转基因植物的分子分析1、在对转基因植物的分子分析中，常进行哪三种水平的检测？在不中水平的检测中，常使用哪些方法？2、核酸杂常用的探针标记方法有哪些？3、Southern杂交和Northern分别包括哪些基本步骤？4、RNA提取时，实验用器皿，应如何进行处理，灭活RNA酶？5、评价RNA质量的两个关键的标准是完整和均一。6、RNA电

6、泳时，必须解决的哪两个问题？如何解决？7、ELISA检测时用的固体支持物是什么？其有何特点？使用该支持物时应注意什么？8、描述利用间接免疫吸附技术检测马铃薯Y病毒的基本程序。