行业标准：DB32∕T 3762.11-2020 新型冠状病毒检测技术规范 第11部分：全基因组测序.pdf

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1、ICS11.020C62DB32江苏省地方标准DB32/T3762.11—2020新型冠状病毒检测技术规范第11部分：全基因组高通量测序TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detectionPart11:Wholegenomehigh-throughputsequencing2020-07-29发布2020-07-30实施江苏省市场监督管理局发布DB32/T3762.11—2020前言DB32/T3762《新型冠状病毒检测技术规范》目前分为以下部分：——第1部分：生物样本采集、运输和保存；——第2部分：病毒分

2、离与鉴定；——第3部分：核酸荧光PCR检测程序；——第4部分：重组酶介导等温扩增程序；——第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序；——第6部分：血清IgM和IgG抗体胶体金免疫层析检测程序；——第7部分：空气样本检测与评估；——第8部分：物体表面检测与评估；——第9部分：医务人员职业暴露检测与评估；——第10部分：微量血清中和试验；——第11部分：全基因组高通量测序。本部分为DB32/T3762的第11部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由江苏省卫生健康委员会提出。本部分由江苏省卫生标准化技术委员会归口。

3、本部分起草单位：江苏省疾病预防控制中心、南京医科大学、苏州第五人民医院、苏州大学附二院、昆山市疾病预防控制中心。本部分主要起草人：崔仑标、葛以跃、赵康辰、朱小娟、朱宝立、程军平、钱志远、罗晓明、沈欢喜。IDB32/T3762.11—2020新型冠状病毒检测技术规范第11部分：全基因组高通量测序1范围本部分规定了新型冠状病毒全基因组高通量测序的环境与设施、设备与耗材、试剂、样本前处理与核酸提取、全基因组测序、结果分析。本部分适用于新型冠状病毒全基因组高通量测序。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的

4、版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求新型冠状病毒实验室生物安全指南中华人民共和国国家卫生健康委员会医疗机构临床基因扩增管理办法原卫生部办公厅医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则原卫生部检验中心国家卫生计生委对高通量测序试点实验室的要求原国家卫生计生委3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1全基因组测序wholegenomesequencing对生物体整个基因组序列进行测定，以获得完整的基因组信息。3.2高通量测序high-throughputsequen

5、cing能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定的技术，又称“下一代”测序（"next-generation"sequencing）或深度测序（deepsequencing）技术。3.3Reads高通量测序平台产生的序列称为reads，即测序读到的碱基序列片段，是测序的最小单位。3.4测序深度sequencingdepth测序得到的总碱基数与待测基因组大小的比值。1DB32/T3762.11—20203.5测序覆盖度sequencingcoverage测序得到的序列占整个基因组的比例。4环境与设施4.1实验室资质及级别要求应符合《新型

6、冠状病毒实验室生物安全指南》的要求，未经培养的感染性材料的操作在采用可靠的方法灭活前进行核酸提取及临床样本的灭活等操作，应在生物安全二级实验室（BSL-2）进行，同时采用生物安全三级实验室（BSL-3）的个人防护；感染性材料或活病毒在采用可靠方法灭活后进行的核酸检测操作应在BSL-2进行。cDNA制备后的相关操作可在生物安全一级实验室（BSL-1）进行。全基因组测序实验室应符合GB19489、《国家卫生计生委对高通量测序试点实验室的要求》、《医疗机构临床基因扩增管理办法》、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》相关要求。4.2操作人员资质及

7、防护要求实验操作人员应经过生物安全培训并取得实验活动上岗证，在身体健康状态良好的情况下准入。样本制备及核酸提取防护参照DB32/T3762.3的第4章进行，测序相关操作采用BSL-1的个人防护。5设备与耗材5.1设备PCR扩增仪、核酸提取仪、核酸定量仪、高通量测序仪。5.2耗材微量移液器及各种配套带滤芯Tip头、96孔板磁力架、1.5mLEP管、0.2mL8联排管、96孔PCR板。6试剂核酸提取试剂盒、核酸定量试剂盒、第一链cDNA合成试剂盒、随机六聚体引物、经验证可靠的适合多重反应的PCR扩增试剂盒、DNA纯化磁珠、文库制备试剂盒、高通量测序

8、试剂盒。7样本前处理与核酸提取参照DB32/T3762.3的第7章进行。8模板制备8.1cDNA制备以提取的核酸为模板，采用第一链cDNA合成试剂盒和