行业标准：DB32∕T 3762.10-2020 新型冠状病毒检测技术规范 第10部分：微量血清中和试验.pdf

《行业标准：DB32∕T 3762.10-2020 新型冠状病毒检测技术规范 第10部分：微量血清中和试验.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS11.020C62DB32江苏省地方标准DB32/T3762.10—2020新型冠状病毒检测技术规范第10部分：微量血清中和试验TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detectionPart10:Serummicroneutralizationtest2020-07-29发布2020-07-30实施江苏省市场监督管理局发布DB32/T3762.10—2020前言DB32/T3762《新型冠状病毒检测技术规范》目前分为以下部分：——第1部分：生物样本采集、运输和保存；——第2部分：病毒分离与鉴定；——第3部分：核酸荧光P

2、CR检测程序；——第4部分：重组酶介导等温扩增程序；——第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序；——第6部分：血清IgM和IgG抗体胶体金免疫层析检测程序；——第7部分：空气样本检测与评估；——第8部分：物体表面检测与评估；——第9部分：医务人员职业暴露检测与评估；——第10部分：微量血清中和试验；——第11部分：全基因组高通量测序。本部分为DB32/T3762的第10部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由江苏省卫生健康委员会提出。本部分由江苏省卫生标准化技术委员会归口。本部分起草单位：江苏省疾病预防控制中心、南京医科大

3、学、苏州第五人民医院、苏州大学附二院、昆山市疾病预防控制中心。本部分主要起草人：葛以跃、崔仑标、迟莹、郭喜玲、陈银、朱宝立、程军平、钱志远、罗晓明、沈欢喜。IDB32/T3762.10—2020新型冠状病毒检测技术规范第10部分：微量血清中和试验1范围本部分规定了新型冠状病毒微量血清中和试验环境与设施、设备与耗材、试剂与材料、操作步骤、结果判定和清场与消毒。本部分适用于新型冠状病毒实验室微量血清中和试验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

4、适用于本文件。新型冠状病毒实验室生物安全指南中华人民共和国国家卫生健康委员会3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1微量血清中和试验serummicroneutralizationtest将病原体及其产物（毒素）与免疫血清相混合，在体内或体外检测其致病力的试验，用以检查动物的免疫状态，测定抗原滴度，以及病原鉴定等。3.2细胞病变效应cytopathiceffect，CPE病毒在宿主细胞内大量增殖，导致细胞病变甚至死亡的现象。大多数病毒感染敏感细胞培养都能引起其显微镜下表现的改变，如细胞聚集成团肿大圆缩脱落及细胞融合成为多核细胞，细胞内出现包涵体，乃至细胞裂

5、解等。3.3半数组织培养感染剂量mediantissuecultureinfectivedose(TCID50)能在培养板孔或试管内引起半数细胞病变或死亡所需的病毒量，用以表征病毒的滴度。4环境与设施4.1实验室资质及级别要求1DB32/T3762.10—2020应符合《新型冠状病毒实验室生物安全指南》的要求，病毒培养包括病毒的分离、培养、滴定、中和试验等实验操作应当在生物安全三级实验室（BSL-3）的生物安全柜内进行。实验室开展相关活动前，应当报经国家卫生健康委批准，取得开展相应活动的资质。4.2操作人员资质及防护要求实验操作人员应经过生物安全培训并取得BS

6、L-3实验活动上岗证，在身体健康状态良好的情况下经实验室主任批准后方可开展活动。操作人员应根据《新型冠状病毒实验室生物安全指南》要求，按照BSL-3个人防护的要求进行防护。5设备与耗材5.1设备生物安全柜、离心机、倒置显微镜、涡旋器、冰箱、CO2培养箱等。5.2耗材N95及以上防护口罩、医用无纺布帽、护目镜、连体防护服、一次性PE手套、一次性手术衣、乳胶手套、防水靴套、微量移液器及各种配套带滤芯Tip头、一次性平皿、离心管、96孔细胞培养板等。6试剂与材料6.1试剂6.1.1Hanks溶液（每毫升含青霉素、链霉素各2000单位）6.1.2DMEM培养液（含10

7、%胎牛血清）。6.1.3DMEM维持液（含2%胎牛血清）。6.1.4消化液（0.25%胰酶和0.025%EDTA-Na2混合液）。6.2材料6.2.1已滴定的新型冠状病毒悬液。6.2.2阳性对照血清、阴性对照血清（正常血清）及待检血清。6.2.3非洲绿猴肾传代细胞（VERO-E6）、人呼吸道上皮细胞、人肝癌细胞（Huh7）或其它敏感细胞。7试验技术要点7.1确定实验室质量控制标准的新型冠状病毒病毒株滴度，应至少有三次独立的滴度水平测定结果，三次实验结果的滴度波动不应超过+/-0.5。7.2中和抗体滴度的判定是以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，因此设

8、置对照实验十分重要。7.3采用固定病毒