脂肪酶作用原理与应用领域.ppt

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1、脂肪酶的作用原理与应用领域报告人：阿衣帕热内容脂肪酶类型脂肪酶作用原理脂肪酶的应用领域脂肪酶（lipase）又称甘油酯水解酶，是指分解或合成高级脂肪段和丙三醇形成的甘油三酸酯酯键的酶。脂肪酶是一类特殊的酯键水解酶，只作用于异相系统，即只在油水界面上作用，而且只有在当底物以微粒，小聚合分散状态或呈乳化颗粒时，脂肪酶对底物水解才有显著的催化作用。脂肪酶基本组成单位仅为氨基酸，通常只有一条多肽链。它的催化活性仅仅决定于它的蛋白质结构。脂肪酶的结构特点同源区段：His-x-y-Gly-Z-Ser-W-Gly或Y-Gly-His-Ser-W-Gly(X,Y,W,Z是可变的氨基酸残疾）；活性中心是

2、丝氨酸残疾，正常情况下受1个a-螺旋盖保护。脂肪酶催化的反应脂肪酶的来源：脂肪酶广泛存在于动物植物和微生物中。植物中含脂肪酸较多的是油料作物的种子，当油料种子发芽时，脂肪酶能与其他的酶协同发挥作用催化分解油脂类物质生成糖类，提供种子生根发芽所必须的养料和能量；动物体内含脂肪酶较多的是高等动物的胰脏和脂肪组织，在肠液中含有少量的脂肪酶，在动物体内，各类脂肪酶控制消化，吸收，脂肪重建和蛋白质代谢等过程；细菌，真菌和酵母中的脂肪酶含量更为丰富。由于微生物种类多，繁殖快，易发生遗传变化，具有动植物更广的作用，且微生物来源的脂肪酶一般都是分泌性的胞外酶。适合于工业化大生产和获得高纯度样品，因此微

3、生物脂肪酶是工业用脂肪酶的重要来源，并且在理论研究方面也具有重要的意义。微生物脂肪酶：细菌28个属放线菌4个属酵母菌10个属其他真菌23个属一共65个属的微生物生产脂肪酶脂肪酶的生产方法脂肪酶菌株的筛选筛选路线：采样→富集培养→初筛→复筛→检测酶活→鉴定菌种→保藏菌种初筛方法：可淘汰85%-90%不符合要求的微生物利用平皿的生化反应进行分离RhodamineB平板筛选法筛选原理：只放在脂肪酶的催化作用下水解生成甘油和脂肪酸，脂肪酸能与RhodamineB的阳离子发生作用，生成黄色的荧光物质，所以用紫外灯的观察，产脂肪酶的菌株周围会出现荧光圈，依据荧光圈的大小进行菌株的筛选。溴甲酚紫平板

4、筛选法：筛选原理：溴甲酚紫作为一种显色剂，其PH变色为5.2-6.8，在碱性条件下显紫色，在酸性条件下鲜黄色，只放在脂肪酶的催化作用下生成的脂肪酸会使培养基的PH降低，产脂肪酶菌株的周围会出现先黄色的透明圈，根据透明圈的有无和大小来筛选产脂肪酶的菌株，透明圈越大说明产脂肪酶活力越强。琼脂块培养法：将分离培养基用灭菌的打孔器制作成许多单个的直径约0.6cm的小琼脂块，排放在干净的培养皿内，将套选的菌株接种在这些小琼脂块上培养，让其充分生长。然后依次再将长满菌的小琼脂块放到酶活测定板上，28℃培养1-3d，观察各菌落周围油脂水解圈的大小，水解菌越大，酶活越强，将水解圈大的菌株纯化后保存在斜

5、面培养基上。复筛选方法——摇瓶培养种子培养基→发酵培养基→收集菌体和上清液，分别测酶活。酶活的测定：在给定的时间内，脂肪酶酶活大小与其催化水解生成的脂肪酸的量成正比。脂肪酶酶活的测定方法很所，根据原理不同，其中酸碱滴定法和分光光度法最为常用，常用的分光光度法有铜皂显色法和对硝基苯酯法。测定脂肪酶酶活常用方法的比较脂肪酶的特性，结构和催化作用原理脂肪酶的M脂肪酶的M因其来源不同而差异很大，不同来源的脂肪酶，其氨基酸组成数目从270-641不等，其M从29-100kD变化。脂肪酶的最适温度和最适PH脂肪酶的最适温度一般在30-60℃之间，最适PH一般为6-10，不同来源的脂肪酶的最适合的温

6、度和最适合的PH差异也比较大。列入一株无花果假丝酵母的脂肪酶最适温度为42℃，最适PH为8.0，一株青霉突变株的最适温度为25℃，最适PH为10脂肪酶的界面活化机理脂肪酶和酯酶都能催化酯的水解，但只有脂肪酶可以催化水不溶性酯的水解。脂肪酶和酯酶的最大差别在于他们与底物的作用形式不同。酯酶的活性随着底物浓度的增加而增大，变现为依赖于底物浓度的正常Michaelis-Menten活性，而脂肪酶则表现出C形曲线，在底物浓度处于溶解状态下，脂肪酶几乎没有活性，只有当底物浓度逐渐增加到超出其溶解度极限时，才表现出明显增加的活性，这种现象称为“界面活性”。脂肪酶的类型和生理分布情况大多数脂肪酶的行

7、动特定位置上的脂至底物（小肠）甘油骨干。列入，人体胰腺酶。只是主要的酶，能分解人体消化系统中的膳食脂肪。转换成单甘酶和两种脂肪酶的摄入由衷的甘油三脂基板。其他及中国类型那个的脂肪酶的活性存在于自然中如磷脂和鞘磷脂，然而，这些通常是从传统的脂肪酶分别对待。在干按预案微生物分泌的一些脂肪酶的表达。尤其是白色念珠菌永远的大量不同的脂肪，这可能反映了广泛的脂肪分解活性，这可能有助于人体组织的持久性拜念珠菌的毒理。生理分布脂肪酶在不同的生物过程，从日常