自111王学良 转基因技术演讲.ppt.ppt

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1、转基因技术的发展自111班王学良110924什么是转基因转基因技术的起源与发展转基因技术的方法与步骤转基因技术对社会的影响转基因技术的利弊概念转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中,由于导入基因的表达,引起生物体的性状的可遗传的修饰,这一技术称之为转基因技术。起源与发展历史背景上世纪五十年代科学家揭示了DNA双螺旋结构。1973年,发明了DNA重组技术。1978年,科学家把来源于人的胰岛素基因植入大肠杆菌,让大肠杆菌合成人胰岛素1980年科学家Gordon用显微注射法获得转基因小鼠1982年美国科学家Palmiter

2、培育成“超级小鼠”1982年重组胰岛素为第一种获准上市的重组DNA药物。1983年世界上第一例转基因植物——一种含有抗生素药类抗体的烟草在美国成功培植。1993年世界上第一种转基因食品——转基因晚熟西红柿正式投放美国市场。这种西红柿耐存储的特性使其货架寿命大大延长。1996年世界转基因作物种植总面积仅为170万公顷2002年全球转基因农作物种植面积已扩大到5870万公顷。迄今全世界已有近50个国家和地区开展转基因作物种植实验,有16个国家的近600万农民以种植转基因作物为主。转基因植物(TRANSGENICPLANT)是指将从动物、其

3、他植物或微生物中分离出的目的基因,导入到植物的基因组中,并且可以稳定遗传给下一代的一类植物,可以是原有性状发生改变,如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。转基因啤酒德国一家公司研制的一种转基因酵母生产的啤酒,其口感和味道都优于常规啤酒。转基因香瓜与普通香瓜的比较左图为存放了5天的普通香瓜;右图为存放了15天后的香瓜普通转基因常用的植物转基因方法花粉管通道法农杆菌转化法基因枪转化法细胞融合法等幼胚愈伤组织发芽生根转基因苗脱分化分化转基因小麦流程细胞分裂素和生长素的相对浓度控制着根和芽的分化。过早分化形成根,会抑制芽的分化,不利于再生成苗。基

4、因枪转化抗性愈伤筛选授粉后11-12天的小麦品种幼胚诱导培养基3-7天PDS1000/He基因枪转化培养3-7天筛选20天筛选培养基分化培养基移栽至大田根长3㎝生根培养基1-2月炼苗1周质粒筛选标记p35SIH3载体的酶切位点与图谱将籽粒用70%酒精漂洗2-3分钟,再用0.1%的氯化汞消毒15分钟,无菌水洗涤3-4次,(2%次氯酸钠)在无菌条件下用接种针挑出幼胚,盾片朝上,接种于幼胚诱导培养基上。25℃,暗培养。注意:1、无菌操作。2、让幼胚与培养基充分接触,保证翻转皿时幼胚不掉下来。接种1)称取60mg金粉(BioRad,1µm直径

5、)或钨粉(M10)于1.5ml离心管中;2)加入新鲜配制的1ml70%乙醇,用旋涡混合器或超声波充分震荡3~5min混合,静置1min;3)10000rpm离心5min,使金粉沉淀,去上清;4)重复以下步骤三次:①加入1ml消毒蒸馏水;②旋涡混合器震荡1min,静置1min;③10000rpm离心2min,使金粉沉淀,去上清液;5)加入灭菌的50%的甘油,使金粉浓度达60mg/ml;金粉处理1)旋涡振荡5min,使在50%的甘油中的金粉沉淀成为悬浮液;2)去掉粗堆集,取50µl(3mg)悬浮混合液于1.5ml离心管中;3)同时振荡,顺

6、序加入5µl质粒DNA(1µg/µl)、50µl2.5MCaCl2和50µl0.1M亚精胺(现配);4)继续振荡2~3min,静置1min;5)10000rpm离心2min,使金粉沉淀,去上清液;6)加入140µl70%乙醇,不破坏沉淀块,弃去上清液;7)加入140µl70%乙醇,不破坏沉淀块,弃去上清液;8)加入60µl100%乙醇,指弹管壁几次,使之重新悬浮,然后低速旋涡2sec;9)每次取10µl放在载体膜中央,每次要尽量取出等量的(500µg)微粒,并尽量做到均匀铺在载体膜(高温高压灭菌)中央1cm直径内,自然条件下干燥。子弹

7、制备注意无菌操作。1)打开稳压电源,真空泵及氦气瓶阀的开关,瞬时针转氦气调节阀,调整系统压力为1300psi;2)按动真空键,抽真空至真空度为27~28Hg时,迅速按下Hold键,接着按住发射键,并保持不动,直到轰击为止,空放2~3枪;3)按通气键待真空表回零后,打开样品室门,开始再一次操作;4)取包被DNA的金粉悬液4µl均匀涂抹在无菌微弹载体膜的中央区域,于超净工作台上吹干备用;基因枪转化5)将可裂膜放入可裂圆片的托座中,再将可裂圆片顺时针拧到气体加速上,用专用工具拧紧;6)将阻挡网先装入载体固定器的托座中,然后将涂有DNA的微弹

8、药载体膜面朝下装入,旋紧固定盖,插入真空室的上层部位;7)将受体材料放入样品室,射程可选60mm或90mm,关好门;8)抽真空,轰击,排气,取出样品,用封口膜将受体材料的培养皿封好;9)关机,把氦气瓶的总开关旋紧,打一次

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