实验十 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制.doc

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1、实验十琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制一、实验目的1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。二、实验原理存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下：草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使

2、等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。三、实验仪器、材料和试剂1、仪器：恒温水浴锅，研钵或组织匀浆机2、材料和试剂（1）新鲜兔肝（2）0.10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）：0.1mol/LNaH2PO419ml加0.1mol/LNa2HPO481ml。（3）0.093mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。（4）0.10mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。（5）0.02%甲稀蓝溶液。（6）液体石蜡。四、实验操作新鲜兔肝立即剪

3、碎，放于组织匀浆机中研碎，加入pH7.4的0.10mol/L磷酸盐缓冲液，制备成200g/L的肝匀浆液备用。取五支试管分别编号，按下表配制反应体系：试剂管号0.093mol/l琥珀酸钠0.10mol/l丙二酸钠0.10mol/l(pH7.4)磷酸缓冲液肝匀浆液0.02%甲烯蓝1——1ml2ml1ml3滴21.5ml0.5ml1ml1ml3滴31ml1ml2ml——3滴42ml——1ml1ml3滴51ml1ml1ml1ml3滴将各管溶液混匀后加一薄层液体石蜡后静置（此时不可摇动!），观察各管中的颜色变化，并记录各管颜色完全变化的时间。思考题:1、抑制

4、的分类及其特点？2、本实验中液体石蜡起什么作用?本实验需在无氧条件下进行,可加一层液体石蜡以隔绝空气。3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动?4、制备肝浆时用磷酸缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么？