细胞衰老特性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书（中文版）.doc

《细胞衰老特性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书（中文版）.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicativesenescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞或活体内（invivo）检测。产品即到即用，性能稳定，参数

2、优化，着色敏感，堪称国际上同类产品最佳。技术背景细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。产品内容清理液（ReagentA）毫升固定液（ReagentB）毫升酸性液（ReagentC）毫升稀释液（ReagentD）毫升染色液（ReagentE）毫升产品说明书1份保存方式保存染色液（ReagentE）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagen

3、tD）和染色液（ReagentE）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月用户自备2毫升离心管：用于配制染色工作液15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液恒温培养箱：用于染色孵育光学显微镜：用于观察染色后的细胞实验步骤操作一、25cm2细胞培养瓶染色实验开始前，将试剂盒里的染色液（ReagentE）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（ReagentD）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（ReagentE），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：1．小心抽去

4、25cm2细胞培养瓶里的培养液2．小心加入xx毫升清理液（ReagentA），清洗生长中的细胞表面3．小心抽去清理液4．小心加入xx毫升固定液（ReagentB），覆盖整个生长表面5．在室温下孵育5分钟6．小心抽去固定液7．小心加入xx毫升酸性液（ReagentC），清洗细胞表面8．小心抽去酸性液9．重复实验步骤7和8一次10．小心加入xx毫升染色工作液，覆盖整个细胞表面11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β-半乳糖苷酶

5、的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。操作二、24孔细胞培养板染色实验开始前，将试剂盒里的染色液（ReagentE）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（ReagentD）到15毫升锥形离心管，加入xx微升染色液（ReagentE），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作。1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液2．每孔加入xx微升清理液（ReagentA），清洗生长中的细胞表面3．小心抽去每孔里的清理液4．每孔加入xx微升固定液（ReagentB），覆盖整个生长

6、表面5．在室温下孵育5分钟6．小心抽去固定液7．每孔加入xx微升酸性液（ReagentC），清洗细胞表面8．小心抽去酸性液9．重复实验步骤7和8一次10．每孔加入xx微升染色工作液，覆盖整个细胞表面11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β-半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色注意事项1．本产品为100次（4个24孔板）或20次（20个25cm2细胞培养瓶）操作2．操作时，须戴手套3．本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生

7、色底物的选择和浓度等达到最优化4．使用时，避免污染母液，否则出现絮状沉淀，影响实验效果5．染色工作液避免光照6．细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24小时7．细胞染色最长孵育时间为24小时8．孵育时避免液体蒸发1．本产品染色敏感，甚至对于微弱表达的酶活性仍然显色清晰；用户可以根据实际情况调整孵育时间和染色工作液浓度，使染色恰到好处2．细胞呈现蓝色的部位为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方3．染色后的细胞样品可以在4℃冰箱里长期保存，同样须避免光照4．本产品适

8、合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：操作容器建议处理液规格载玻片100微升载玻片培养皿1毫升35mm培养皿1毫升96孔培养板100微升48孔培养板200微升24孔培养板500微升12孔培养板1毫升6孔培养板2毫升25cm2细胞培养瓶3毫升5．本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定着色敏