课题2 土壤中分离尿素的细菌的分离与计数课件.ppt

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1、导入新课上一节课我们已经学习了培养基的配制以及接种技术，现在我们就来学习如何从土壤中将我们需要的微生物进行分离。土壤微生物尿素是由碳、氮、氧和氢组成的有机化合物。外观是白色晶体或粉末。尿素化学式尿素尿素通常作为一种植物的氮肥，广泛应用于各种作物和土壤。但是，农作物不能直接吸收尿素，必须先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和二氧化碳，才能被植物利用。CO(NH2)2+H2O→2NH3+CO2脲酶这种细菌能够分解尿素，是因为他们能够合成脲酶。脲酶脲酶是一种蛋白质，能溶于水，不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂。加热和重金属离子都能抑制或降低脲酶的活性。你能想一

2、想怎样能将分解尿素的细菌从土壤中分离出来吗？想一想课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题2微生物的培养与应用一、研究思路二、实验设计三、操作提示四、结果分析与评价五、课题延伸研究培养基对微生物的选择作用。从土壤中分离出能够分解尿素的细菌；统计每克土壤样品中含有多少这样的细菌。知识与能力过程与方法教学目标从感性上认识分离尿素的细菌，了解其具有的作用。情感态度与价值观1.课题重点对土样的选取和选择培养基的配制。2.课题难点对分解尿素的细菌的计数。重点与难点（一）筛选菌株一研究思路耐热微生物温泉耐寒微生物冰川分解石油的细菌油田筛选原则：根据微生物

3、对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。实例：TaqDNA聚合酶的发现DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶，该去哪里寻找？科学家是从水生耐热细菌Taq中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶的。为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来呢？这是因为热泉70~80℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。实验室中微生物的筛选，也应用了同样的原理，即人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。1、什么是微生物的选择培养？利用

4、培养基的组成使适宜生长的特定微生物得到较快繁殖的技术。2、选择培养基定义允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。选择培养基配方葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H200.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml在左图的培养基配方中，碳源和氮源分别是什么？碳源——葡萄糖氮源——尿素绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。请你分析该培养基的配方，想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？答：这种培养基

5、具有选择作用。微生物的生长需要氮源，该培养基中只加入了一种氮源——尿素，只有能分解尿素的微生物才能生长，所以具有选择性。（二）统计菌落数目理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。样品稀释培养示意图菌落数目在30-300个之间的平板最适宜计数思考如何根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式进行计算。每克样品中菌株数＝某一稀释度下的平均菌落数涂布时用到的稀释液体积

6、mL×稀释倍数（三）设置对照排除实验组中非测试因素对实验结果的影响。目的什么是对照实验？除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，称为对照实验。通过书中的案例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。二实验设计菌落计数配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养土壤中细菌分离与计数示意图实验具体操作步骤：1、土壤取样从富含有机物、潮湿、酸碱度适中的土壤中取样。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。2、制备培养基准备牛肉膏蛋白胨培养基和用尿素作为氮源的选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作

7、用;选择较为宽泛的稀释范围，稀释倍数为103-107;每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基；准备8个灭菌试管和1个灭菌移液管。探究为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/g）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还

8、应当有针对性的提供选择培养的条件。3、微生物的培养与观察将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必