医学免疫学课件：22 23 免疫诊断与防治.ppt

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1、第二十二章免疫学检测技术的基本原理主要内容抗原或抗体的检测免疫细胞的检测抗原抗体反应特点抗原抗体反应的特异性抗原抗体反应的可逆性抗原抗体反应的可见性抗原抗体比例合适肉眼可见IC(凝集物，沉淀物）第一节检测抗原或抗体的体外试验抗原抗体复合物的形成抗原多于抗体抗原与抗体数量相当抗原少于抗体抗原-抗体反应影响因素1电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。2温度：一般常使用反应在37度水浴或孵育箱中进行。3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度为PH6~8。抗原

2、-抗体反应受多种因素影响往往采用人或动物的血清作为抗体来源，体外的抗原抗体反应也称血清学反应。经典的血清学反应：凝集反应（agglutinationreaction)沉淀反应(precipitationreaction)免疫标记技术（一）凝集反应(agglutination)颗粒性Ag与相应Ab结合后，出现肉眼可见的凝集物。直接凝集反应间接(被动)凝集反应1.直接凝集反应①玻片法：定性，已知抗体测未知抗原细菌的鉴定和分型人类ABO血型测定1.直接凝集反应②试管法：定量，用已知抗原测未知抗体的量肥达

3、氏试验-----诊断伤寒和付伤寒2.间接凝集反应可溶性抗原载体颗粒免疫微球（致敏载体）＋＋抗体凝集间接凝集反应：可溶性抗原先吸附在一与免疫反应无关的颗粒载体上，成为致敏颗粒，再与相应抗体结合，出现的凝集现象.常用的载体颗粒乳胶颗粒人O型RBC、绵羊RBC(二)沉淀反应概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在一定条件下形成沉淀物的现象。可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、组织浸出液、细菌滤液等类型：1）单向琼脂扩散试验(singlelagarimmunodiffusion)2）双向琼脂扩散试验(doubleag

4、arimmunodiffusion)3）对流免疫电泳（counterimmunoeletrophoresis)1）单向琼脂扩散试验应用：Ag鉴定，定量2）双向琼脂扩散试验(三)免疫标记技术利用荧光素、酶、放射性核素等标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。四大标记技术：1）免疫酶测定(enzymeimmunoassay,EIA)酶联免疫吸附试验(ELISA）2）免疫荧光技术(immunofluorescencetechnique)3）放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)4）免疫胶体

5、金技术（immunologicalcolloidalgoldsignature,ICS)1.酶免疫测定用酶标记抗体进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断结果。抗原抗体反应＋酶促反应酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶标抗体进行检测的抗原抗体反应。特点：敏感性高（ng-pg），操作简便类型：直接法(双抗体夹心法):Ab+Ag+Ab*间接法:Ag+Ab+抗Ab*双抗体夹心法2.免疫荧光技术免疫

6、荧光技术:用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。分类：(1)直接荧光法（2)间接荧光法结果观察:(1)荧光显微镜(2)流式细胞仪(Flowcytometer，FCM)3、放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术第二节免疫细胞功能的检测免疫细胞的分离免疫细胞的功能测定一、免疫细胞的分离外周血单个核细胞T、B细胞的分离与鉴定磁珠分离法荧光激活细胞分选仪分离法（流式细胞术，FCM)外周血单个核细胞二、免疫细胞功能的测定（一）T

7、细胞功能测定：(1)T细胞增殖(转化)试验：形态计数3H-TdR或125I-UdR掺入法MTT比色法（2）皮肤试验淋巴细胞转化试验（形态学示意图）PHA刺激48~72小时培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图结核菌素注射受试者前臂内侧皮内红肿硬结＞0.5cm阳性观察局部超敏反应48～72小时后无红肿硬结或＜0.5cm阴性原理：Ⅳ型超敏反应步骤：皮肤试验（结核菌素试验）应用：OT试验（二）B细胞功能测定(1)单向琼脂扩散试验等测定Ig

8、的含量(2)抗体形成细胞测定溶血空斑形成试验第二十三章免疫学防治特异性免疫自然免疫人工免疫自然被动免疫自然主动免疫来自母亲的抗体自然感染（隐性、显性）人工被动免疫抗毒素免疫球蛋白人工主动免疫疫苗类毒素SIgAIgG一、人工主动免疫输入抗原物质（疫苗，类毒素)，主动刺激机体免疫系统建立长期的免疫应答，获得特异性免疫力的方法。作用:预防或治疗慢、持久主动免疫被动免疫(一)灭活疫苗（二）减毒活疫苗（三）类毒素病原体灭活减毒活病原体细菌外毒素脱毒体液免疫体液免疫、细胞免疫类毒素（toxio