液相色谱仪日常维护及常见故障ppt课件.ppt

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1、液相色谱仪日常维护及常见故障分析主讲：王太松1流动相2脱气机（在线）3泵（单元、二元、四元）4进样器（手动、自动）5色谱柱6检测器(VWD/DAD/FLD/RID…)一、液相色谱仪日常维护及注意事项选择合适的滤膜聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂，推荐用于蛋白质和其相关的样品。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸、70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：具有蛋白质吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂。注意：1，每张滤膜只能用

2、一次。2，水相和有机相不要搞混。柱塞清洗附件SealWashHPLC使用缓冲溶液Buffer时，由于缓冲盐溶液存在高压盐析现象，析出的细小盐粒会损伤蓝宝石柱塞杆和密封垫，从而造成漏液等故障现象，因而建议选配柱塞清洗附件SealWash。缓冲盐浓度大于0.01mol时，强烈建议选配在线的柱塞清洗附件SealWash。清洗液配置：90%水+10%异丙醇溶液，流速为2-3滴/min。该混合液可抑制菌类生长和降低水的表面张力。清洗液虹吸流出，不能干涸。目的脱气方法：氦气脱气回流加热脱气真空脱气超声脱气排除溶解在流动相中的氧气和氮气2脱气机在线真空

3、脱气机为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。1，新的脱气机或新的管路；2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时；3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。4，完成上述操作后，打开清洗阀，用大流量冲洗，5ml/min。12mlSolenoidvalve阻尼器/压力传感器泵驱动溶剂瓶梯度比例阀主动输入阀AV出口球阀BOV清洗阀PurgeValve柱塞杆Piston3泵二元泵工作原理DamperPurgevalveMixerABInletva

4、lveOutletvalveWasteInletvalveOutletvalve泵的注意事项1，溶剂的过滤、脱气；2，避免使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速—较低的系统压力。4，更换过滤白头；5，考虑溶剂的相容性；6，尽可能使用新鲜的水；7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，在0—200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。四元泵：四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在下面通道，以避免盐颗粒析出。二元泵：设

5、置压缩因子补偿，以达到最佳比例效果。样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品，确保样品中不含固体颗粒用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小4进样器六通阀手动进样阀-六通阀ToWasteSampleLoop(FixedVolume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToColumnPumpFromPumpToWaste手动进样器样品要干净、经过过滤。合适的进样体积，比如定量环为20ul，进样体积应为0—10ul，或者20ul，进样20ul时注射样品量应至少60ul以上。定期清洗进样阀，清洗过

6、程如下：1，将进样阀旋至Inject位置；2，用带有专用头的注射器用纯水约20—30ml冲洗进样阀；3，将进样阀旋至Load位置。参考左图。手动进样器自动进样器Meteringdevice6-portvalveSamplingunitFrompumpTocolumnTowaste准备位置调用样品瓶吸样品进样和运行位置标准进样过程...自动进样器样品要干净、经过过滤。洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。多次吸液用于进样量大于100ul预柱和保护柱从泵来的流动相预柱进样口保护柱分析柱至检测器预柱是针对

7、流动相来保护色谱柱保护柱是针对样品来保护色谱柱5色谱柱色谱柱保护过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。柱子在不使用时，两端密封保存在适当的溶剂中保存柱子注意色谱柱的pH值使用范围不要高压冲洗柱子不要高温下过长时间使用硅胶键合相色谱柱的再生进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-41.6ml30ml250-43.2ml60ml250-10-20ml400ml请根据下表选择您的再生方法：极性固定相（如Si，NH2*，DI

8、OL基色谱填料）的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水0.05M稀硫酸可以用来