饲料中粗蛋白的测定.doc

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1、饲料中粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。二、适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。三、实验原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。四、试剂（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。（5）混合指标剂：甲基

2、红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；①0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3mL盐酸注入1000ml蒸馏水中。②0.02mol/L盐酸标准溶液：1.67mL盐酸注入1000ml蒸馏水中。（7）蔗糖：分析纯。（8）硫酸铵：分析纯，干燥。（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。五、仪器设备（1）实验室用样品粉碎机或研钵。（2）分样筛：孔径0.45mm（40目）

3、。（3）分析天平：感量0.0001g。（4）消煮炉或电炉。（5）滴定管：酸式，10、25mL。（6）凯氏烧瓶：250mL。（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。（8）锥形瓶：150、250mL。（9）容量瓶：100mL。（10）消煮管：250mL。（11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。六、分析步骤试样的选取和制备:选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。（1）仲裁法①试样的消煮称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样

4、混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。②氨的蒸馏A.常量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入60～100ml蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。B.半微量蒸馏法将试样消煮

5、液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。注：上

6、述两种蒸馏法测定结果相近，可任选一种。C.蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，分别按上述两种步骤进行操作，测得硫酸铵含量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。③滴定蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。（2）推荐法①试样的消煮称取0.5～1g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（仪器自备）或6.4g混合催化剂，12mL硫酸，于420℃下的消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。②氨的蒸馏采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。采用半自动

7、定氮仪时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥瓶内。③滴定用0.1mol/L的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。7．空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，