稳态-瞬态荧光光谱仪操作说明书.doc

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1、稳态/瞬态荧光光谱仪（FLS920）操作说明书一、仪器测试原理时间相关单光子计数原理是FS920测量荧光寿命的工作基础。时间相关单光子计数法(time－correlatedsinglephotoncounting)简称“单光子计数(SPC)法”，其基本原理是，脉冲光源激发样品后，样品发出荧光光子信号，每次脉冲后只记录某特定波长单个光子出现的时间t，经过多次计数，测得荧光光子出现的几率分布P(t)，此P(t)曲线就相当于激发停止后荧光强度随时间衰减的I(t)曲线。这好比一束光(许多光子)通过一个小孔形成的衍射图与单个光子一个一个地通过小孔长时间的累计可得完全相同的衍射图的原理是

2、一样的。二、测量之前需要特别注意的事项1.在切换光源、修改设置或放样品之前必须把狭缝（Δλ）关到最小（0.01nm），否则会损坏光电倍增管！如果打开样品室盖子之后，Em1的SignalRate增加，请停止实验并立即与工作人员联系！2.测量样品的瞬态性质之前，请用先对样品的稳态性质进行表征，了解样品的激发光谱与发射光谱及最佳激发波长和发射波长；3.用PMT检测时，必须等稳压电源CO1的温度示数在-15ºC以下才可以开始采集数据；4.狭缝范围0.01～18nm，调节时注意不要超过其上限；（L1:1mm相当于1.8nm,200-900nm)；（L2:1mm相当于5.4nm,900-

3、1900nm)5.每次设置完参数后都要点击Apply或者回车键确定；6.文件保存路径为：C:data导师自己文件夹7.用专用u盘拷贝数据并到另一台电脑发送数据8.如实填写仪器使用记录，爱护仪器。三、稳态荧光光谱的测定1.紫外可见区稳态荧光光谱的测定步骤1)打开Xe900电源，待其稳定，稳定后电压约16-17V，电流25A；2)打开CO1电源和FLS920主机电源；3)打开计算机，双击桌面上F900图标，进入工作站4)点击窗口左上角的按钮，进入SignalRate设置窗口，先将ExcitationWavelength和Em1Wavelength处的Δλ均设置为0.01nm

4、，按回车键(Enter)或者点击Apply确认，再将Source设置为Xe900，Em1Detector设置为R955，然后点击Apply；1)打开样品室的盖子，放入待测样品，然后盖好；2)调节slit到合适大小（一般2.5mm）。注意：对于未知样品的最大Em的情况下，Em1的slit第一次只能开一点（一般<0.3mm），以避免荧光最强未知的signalrate大于106，破坏PMT。3)点击按钮，选择EmissionScan，进入设置窗口，在General标签内选择L1，在Excitation标签内，将MonochromatorWavelength设置为合适的激发波长，在E

5、mission1标签内根据待检测波长将Detector设置为R928-PA，然后在EmissionScanParameters内设置波长扫描范围、扫描间隔（step）、停留时间（DwellTime）和扫描次数（NumberofScans），设置完毕后点击Start即开始测量，得到发射光谱(荧光光谱)；4)单击按钮，选择ExcitationScan，进入设置窗口，在General标签内选择L1，在Emission1栏内，将MonochromatorWavelength设置为待检测波长，Detector根据待检测波长设置为R955，然后在ExcitationScanParamet

6、ers内设置波长扫描范围、扫描间隔（step）、停留时间（DwellTime）和扫描次数（NumberofScans），设置完毕后点击Start即开始测量，得到激发光谱；5)在SignalRate设置窗口内输入相应的ExcitationWavelength和Em1Wavelength值，逐渐加大Δλ，使Em1获得一个合适的SignalRate（注意：在设置后需要按下回车或者Apply按钮设置才真正生效，Ref的SignalRate不要超过107，Em1的SignalRate最好不要超过105，千万别超过106）；按照步骤7）进行测试，得到发射光谱。注意：对于已知样品的最佳Ex

7、、Em波长情况下，可以直接跳过7）与8）步骤，直接进入9）。1.近红外区稳态荧光光谱的测定步骤如果测量范围在近红外区(900-1900nm)，需要用到InGaS检测器，具体操作步骤和设置如下：1)打开Xe900电源，待其稳定，稳定后电压约16-17V，电流25A；2)打开FLS920主机电源；3)点击窗口左上角的按钮，进入SignalRate设置菜单，将ExcitationWavelength和Em2Wavelength处的Δλ均设置为0.01之后，Source设置为Xe，Em2Detector设置为I