微生物的实验室培养(一轮).ppt

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1、专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养1、形态：球形、杆形、螺旋形。螺旋菌球菌杆菌一、细菌2、繁殖——二分裂20分钟——30分钟，分裂一次无鞭毛的球菌：菌落较小较厚、边缘整齐.有鞭毛的细菌：菌落大而扁平、边缘波状或锯齿状.问：菌落在生态学上属于什么单位？二、菌落菌落可以作为菌种鉴定的重要依据。单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。几种菌落一、微生物的实验室培养（一）培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质一般的培养基均需要碳源、氮源、生长因子、无机盐和水等。1、培养基的基本成分＊不同培养基要

2、满足不同微生物对pH、特殊营养物质及氧气的需求。2、培养基的种类（1）按物理状态来分：分为固体培养基和液体培养基(还有半固体)。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分：分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分：分为天然培养基和合成培养基。（二）无菌技术消毒灭菌使用较为温和的方法来杀死部分对人体有害的微生物。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行；将培养皿、接种用具进行；接种的过程要在附近进行。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。清洁消毒灭菌酒精灯1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃

3、下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(1)消毒的方法：1.灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。（2）常用的灭菌方法2.干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170OC中加热1～2h即可。3.高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内（见教材16页图2-4）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持15～30min即可。二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算2

4、.称量3.溶化4.灭菌5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右（P17）平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。（二）纯化大肠杆菌1.平板划线法在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？杀灭残留在接种环的微生物。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端

5、开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。系列稀释操作101102103104105106(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。(2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。涂布平板操作（P19）(1)将涂布器浸在盛有7

6、0％的酒精的烧杯中。(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却8～10s。(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布平板操作后，37度恒温培养，如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较小，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延1、下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有

7、关问题。实验步骤：(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，你选用____________法接种样品。(3)适宜温度下培养。结果分析：(1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是___，其理由是____________________________________________________。A．一个平板，统计的菌落数是230B．两