微流控在大肠杆菌检测方面的学习总结.pptx

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1、微流控在大肠杆菌检测方面的学习总结钟一2013年9月25日目录1、大肠杆菌的定义及种类2、国标要求饮用水中大肠杆菌含量标准3、目前大肠杆菌常规检测方法与分析目录结构4、微流控在大肠杆菌检测方面的应用探究1、大肠杆菌的概念及分类大肠杆菌是1885年由TheodorEscherich发现，分布在自然界，大多数是不致病的，主要附生在人或动物的肠道里，为正常菌群，少数的大肠杆菌具有毒性，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。大肠杆菌属于细

2、菌。2、国标中饮用水大肠杆菌含量标准总大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出耐热大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出菌落总数（CFU/mL）100生活饮用水卫生标准GB5749-2006水质常规指标及限值3、目前大肠杆菌常规检测方法与分析怎样高效迅速的检测到大肠杆菌呢？？？3.1、传统方法—多管发酵法多管发酵法是以最可能数（简称MPN）来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。载

3、体：培养基。优点：适用于带菌量极少、其他方法不能检测的食品。缺点：操作复杂，检测时间较长，，多级稀释可能带来误差。时间：48h。3.2、传统方法—滤膜法滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45μm）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M−FC培养基上44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。载体：培养基。优点：具有高度的再现性，可用于检验体积较大的水样，能比多管发酵技术更快地获得肯定的结果。缺点：培养时间长，缺乏特异性，检验浑浊度高、非大肠杆菌类的细菌密度大的水样时，有其局限性，肉眼读数纯在误

4、差。时间：约24h±2h。微生物滤膜法3.3、大肠杆菌快速检测法—酶底物法大肠杆菌酶底物法是指在选择性培养基上能产生p一半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，并能产生压葡萄糖醛酸酶(β一ghicuroNidase)分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，并且会使培养液呈黄色。载体：培养基（科立得试剂）。优点：快速、简单，结果较准确。缺点：水样稀释倍数会对结构产生影响。时间：24h。酶底物法对地表水样的检测3.4、大肠杆菌快速检测法—聚合酶链反应法PCR(polymerasechainreaction)即聚

5、合酶链反应技术,该技术是在1971年首先被Kleppe等提出来的,是指利用耐热DNA聚合酶的作用,通过变性-延伸-复性的循环操作,在体外迅速将DNA模板扩增数百万倍的一种克隆技术。载体：凝胶电泳。优点：可以快速准确、特异、灵敏地对大肠杆菌进行定量分析。缺点：难以精确定量，操作不慎易交叉污染，操作复杂，仪器昂贵。聚合酶链反应对大肠杆菌的检测4、微流控在大肠菌落检测中的探究核酸探针技术酶联免疫吸附法生物传感器法生物传感器法流式细胞技术生物传感器法二氧化硅荧光纳米颗粒技术生物传感器法多重PCR技术谢谢