第四章 高效液相色谱分析法ppt课件.ppt

第四章 高效液相色谱分析法ppt课件.ppt

ID:58672542

大小:1.27 MB

页数:54页

时间:2020-10-05

第四章  高效液相色谱分析法ppt课件.ppt_第1页
第四章  高效液相色谱分析法ppt课件.ppt_第2页
第四章  高效液相色谱分析法ppt课件.ppt_第3页
第四章  高效液相色谱分析法ppt课件.ppt_第4页
第四章  高效液相色谱分析法ppt课件.ppt_第5页
资源描述:

《第四章 高效液相色谱分析法ppt课件.ppt》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库

1、第四章高效液相色谱分析法第一节高效液相色谱仪第二节主要分离类型第三节液相色谱的固定相与流动相第四节影响分离的因素与分离类型的选择第一节高效液相色谱仪美国安捷伦公司Agilent1200第一节高效液相色谱仪美国戴安公司UltiMate3000第一节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪结构流程二、高压输液系统三、梯度淋洗装置六、液相色谱检测器五、分离系统四、进样系统第一节高效液相色谱仪储液瓶高压泵进样器色谱柱检测器废液一、高效液相色谱仪结构流程高压输液泵、高效分离住、高灵敏度检测器第一节高效液相色谱仪二、高压输液系统(高压泵)要求:输出压力高;平稳、脉冲小;流量稳定可

2、调;耐腐蚀。机械往复柱塞泵结构图第一节高效液相色谱仪三、梯度淋洗装置在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、极性来改善分离和调节出峰时间。第一节高效液相色谱仪两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定比例送入混合器,混合后进入色谱柱。一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。高压梯度(外梯度)低压梯度(内梯度)第一节高效液相色谱仪通过改变流动相的组成来调整组分的k值,改变分离因子α值,以达到最短时间内得到最佳分离的目的。梯度洗脱梯度洗脱的特点改善分离,加快分析速度;改善峰形,减少拖尾;可能引起基线漂移。第一节高效

3、液相色谱仪四、进样系统六通阀进样装置第一节高效液相色谱仪内径:1~6mm,柱长:5~50cm;柱填料粒径:5~10µm为保护色谱柱,通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。五、分离系统(色谱柱)第一节高效液相色谱仪六、液相色谱检测器类型紫外检测器示差折光检测器荧光检测器电化学检测器电导检测器第一节高效液相色谱仪(一)、紫外检测器—应用最广泛的检测器基本原理:试样组分对特定波长的紫外光具有选择性的吸收,吸光度与试样组分浓度之间的定量关系符合郎伯-比耳定律。优点:灵敏度高,线形范围宽;死体积小;波长可选;对流速和温度变化不敏感;可用于梯度洗脱。缺点:无紫外-可见

4、吸收组分不响应;流动相选择受一定限制。第一节高效液相色谱仪一些常用溶剂的紫外截止波长溶剂二硫化碳氯仿四氢呋喃苯乙睛甲醇水紫外截止波长/nm380245212210190205187第一节高效液相色谱仪(a)可变波长紫外检测器(b)二极管阵列检测器第一节高效液相色谱仪两种检测器的色谱图(a):可变波长紫外检测器;(b):二极管阵列检测器峰纯度检验第一节高效液相色谱仪(二)、示差折光检测器—通用型检测器基本原理:连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光系数差值,该值与试样池流动相中的组分浓度成正比。每种物质具有不同的折光指数。生命科学中各类糖类化合物,没有紫外吸收

5、,一般要用示差折光检测器。第一节高效液相色谱仪缺点:灵敏度低;对温度敏感;不能用于梯度洗脱。第一节高效液相色谱仪(三)、荧光检测器—专用型检测器基本原理:在一定的条件下,荧光强度与流动相中的组分的浓度成之比。对多环芳烃,维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。第一节高效液相色谱仪特点:高灵敏度;高选择性;可用于梯度洗脱。第二节主要分离类型一、液-固吸附色谱二、液-液分配与化学键合相色谱三、离子交换色谱四、离子对色谱五、空间排阻色谱六、亲和色谱第二节主要分离类型一、液-固吸附色谱流动相:各种不同极性的一元或多元溶剂。固定相:固体

6、吸附剂,如硅胶、氧化铝等。颗粒度较小,5-10μm分离机理:流动相中的溶质分子(X)与溶剂分子(S)在固体吸附剂上竞争吸附的结果。第二节主要分离类型下标M、s分别代表流动相和固定相,n代表被吸附的溶剂分子数;K代表吸附平衡常数。吸附平衡常数K不等于分配系数。K值越大,保留时间越长,分配系数大。适用对象:相对分子质量中等的油溶性试样,对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。第二节主要分离类型二、液-液分配与化学键合相色谱(一)、液-液分配色谱固定相与流动相均为液体(互不相溶)。基本原理:组分在固定相和流动相上的分配。与气相色谱中气--液色谱比较?改变流动相的组

7、成来改善分离效果。K不仅与固定相的种类有关,也与流动相的种类有关。第二节主要分离类型固定相极性>流动相极性正相分配色谱(正相柱)组分极性越大,保留时间越长;使用极性化合物的分离。反相分配色谱(反相柱)固定相极性<流动相极性组分极性越小,保留时间越长;适用非极性化合物的分离。第二节主要分离类型(二)、化学键合固定相色谱固定相非常稳定,在使用中不易流失。由于可将各种极性的官能团键合到载体表面,因此它适用于种类繁多样品的分离。特点将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶(担体)表面的游离羟基上。第二节主要分离类型1.键合固定相制备ODS(C18)键合相硅胶十八烷基氯硅烷

8、非极性硅烷化反应使用pH范围:2-8第

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。