第二章天然药物化学成分提取分离鉴定方法与技术色谱法ppt课件.ppt

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1、第二章提取分离鉴定的方法与技术——色谱法1碳酸钙（固定相）色素混合液石油醚(流动相）1906年，Tsweet发现色谱分离现象色谱柱色带“像光谱中的光线一样，色素混合物的不同组分有规律地排列在碳酸钙柱上而彼此分离。”——Tsweet,《德国植物学报》,1906.2柱色谱薄层色谱纸色谱高效液相色谱3色谱法（Chromatography）一、色谱法在研究天然药物有效成分中的应用：分离混合物精制化合物鉴定化合物二、原理：利用混合物中各成分在固定相和移动相中吸附、分配及其亲和力的差异而达到分离。4色谱的三要素固定相移动相被分离物质三者相互关系？5按原理不同可分为：吸附色谱法*分配色谱法*离子交换色谱法凝

2、胶滤过色谱法（分子筛滤过色谱）大孔吸附树脂法高效液相色谱法（自学）气相色谱法（自学）三、分类：6吸附色谱法*（AdsorptionChromatography)1）原理：利用吸附剂对混合物中各成分分子吸附能力的差异而达到分离的色谱法。2）分类：物理吸附化学吸附半化学吸附7物理吸附*：化学吸附：半化学吸附：“相似者易吸附”避免氢键形成能力分子间力，无选择性，可逆。硅胶、氧化铝、活性炭化学键，选择性较强，常不可逆。硅胶----生物碱碱性氧化铝----黄酮、蒽醌等氢键，选择性较弱，多可逆。聚酰胺83）吸附色谱的三要素9溶解能力流动相溶质吸附剂吸附作用竞争在液-固吸附色谱中，溶质的保留和分离选择性决定

3、于下列三个因素：吸附作用10硅胶：适用于中性和酸性成分氧化铝：适用于中性和碱性成分活性炭：非极性吸附剂聚酰胺：高分子聚合物,氢键吸附极性吸附剂a、吸附剂（固定相）11硅胶（silica）SiO2XH2O酸性、亲水性吸附剂。结构：内部----硅氧交联结构→多孔结构→范德华力表面----有硅醇基→氢键吸附适用于中性或酸性亲脂性成分的分离。12特性：1）极性吸附剂，“相似者易吸附”物质极性↑，吸附能力↑2）吸水→失活105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力注意：活化温度不宜高，不宜分离碱性物质。13氧化铝（aluminiumoxide）

4、极性吸附剂，最适于分离植物中的碱性或中性的亲脂性成分。有酸性、碱性和中性三种规格。吸附特性与硅胶类似，但碱性氧化铝不宜分离酸性物质。14聚酰胺（polyamide）结构：--[CH2-CO-NH-]-n原理：氢键吸附学说酰氨基与化合物（羟基、羧基及醌基）形成氢键吸附。15用途：分离黄酮类、酚类、醌类、有机酸类及鞣质。影响吸附强弱的因素：1、流动相：水＞甲醇或乙醇＞丙酮＞氯仿＞稀氨水＞甲酰胺;2、分子结构：a、形成氢键数目多，吸附能力强。b、形成分子内氢键，吸附力减弱。C、芳香化合物中，共轭双键多，吸附牢。16化合物结构对聚酰胺吸附作用的影响形成氢键的数目成键基团位置双键的数目分子内氢键课本第3

5、3页17活性炭（activatedcarbon）非极性吸附剂，对非极性物质具有较强的亲和力，在水中对溶质表现出强的吸附能力。从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的极性越小，洗脱能力越强。特别适合水溶性物质的分离。18b、溶剂（移动相）遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理：极性吸附剂，溶剂的介电常数愈大，洗脱能力愈强；非极性吸附剂，溶剂的介电常数愈大，洗脱能力愈弱。c、被分离物质遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理：对于极性吸附剂而言：被分离成分极性大，吸附牢，难以洗脱；被分离成分极性小，吸附力弱，容易洗脱。一般化合物的极性按下列官能团的顺序增强：—CH2—CH2—，—CH2=CH2—，—OC

6、H3，—COOR，>C=O，—CHO，—NH2，—OH，—COOH19四、操作方式1、薄层色谱法（TLC）*定义：将吸附剂均匀的铺在平板上，把要分离分析的样品点加到薄层色谱板上，然后用适当的溶剂系统展开，在一定的条件下显色或直接在日光或紫外光下观察所获得的斑点，从而达到分离、分析、鉴定的目的。201）薄层色谱的吸附剂和支持剂：在选用吸附剂或支持剂时，一般是根据被分离物质的化学性质来选用。当不了解被分离物质的化学性质时，可以先选用最常用的硅胶或氧化铝，如果分离效果不好，可再改用其他的吸附剂或支持剂。21常用的硅胶吸附剂粒径：200-300目种类：硅胶G——硅胶+粘合剂煅石膏硅胶GF254——含有

7、荧光物质硅胶H——不含粘合剂煅石膏硅胶HF254——含有荧光物质22常用的展开剂正己烷、环己烷、四氯化碳、甲苯、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、甲醇、水理想的溶剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大，且尽量在0.2-0.8之间。当单一溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。232）薄层色谱的一般操作a、制板b、活化c、点样d、展开e、显色f、计算比移值24操作技术——手