第6章沉淀反应kyhsppt课件.ppt

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1、第六章　沉淀反应抗原抗体反应类型凝集反应颗粒性抗原沉淀反应可溶性抗原补体结合反应细菌抗原溶菌反应红细胞抗原溶血反应中和反应毒素抗原沉淀反应（precipitation）是可溶性抗原与相应的抗体在适当条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象第一阶段Ag+Ab→AgAb特异性可溶性的反应第二阶段nAgAb→AgAbn大分子肉眼可见的沉淀现象1898年Kraus毒素－抗毒素的沉淀现象1905年Bechhold沉淀反应可在凝胶中进行1946年Oudin试管免疫扩散技术(定性)1965年Mancini单向免疫扩散技术(定量)20世纪70年代　免疫浊度法(进入自动

2、化阶段)第一节　沉淀反应的特点第二节　液体内沉淀试验絮状沉淀试验免疫浊度测定环状沉淀试验标记免疫技术第三节　凝胶内沉淀试验单向扩散试验OudinManicini双向扩散试验OkleyOuchterlony免疫电泳技术第四节　沉淀反应的应用第一节　沉淀反应的特点可溶性抗原特异性比例性可逆性阶段性速率比浊终点比浊沉淀反应分两个阶段，第一阶段发生抗原抗体特异性结合，第二阶段形成可见的免疫复合物经典的沉淀反应在第二阶段观察或测量沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法免疫浊度法则在第一阶段测定免疫复合物形成的速率，称为速率法现代免疫技术（如各种标记免疫技术）

3、多是在沉淀反应的基础上建立起来的，因此沉淀反应是免疫学方法的核心技术第二节　液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验二、免疫浊度测定三、环状沉淀试验一、絮状沉淀试验絮状沉淀试验历史较久，且实用方法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物受抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法1.Ag稀释法（Dean-Webb法）将可溶性Ag作系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合,RT或者37℃反应,产生的沉淀物随Ag浓度改变而变化.目的：确定与恒量Ab反应的最佳Ag量最适比RT：roomtemperature

4、表1Dean-Webb定量沉淀试验(以牛血清白蛋白为例的实验结果)(mmol/L)管号抗原抗体总沉淀量反应过剩物抗原沉淀量抗体沉淀量沉淀中Ab/Ag10.0030.680.093Ab0.0030.09030.020.0050.680.145Ab0.0050.14028.030.0110.680.249Ab0.0110.23821.740.0210.680.422Ab0.0210.40119.150.0320.680.571Ab0.0320.53916.860.0430.680.734－0.0430.69116.170.0640.680.720Ag－

5、－－80.0850.680.601Ag－－－90.1710.680.464Ag－－－100.3410.680.368Ag－－－2.Ab稀释法――（Ramon）法恒定量的Ag，与系列不同程度稀释的Ab反应，计算结果同上法目的：确定与恒量Ag反应的最佳Ab量可得出Ab结合价和最适比3.棋盘格法获得抗原与抗体的最佳比例将以上两法相结合即抗原和抗体同时稀释称为棋盘格法（亦称方阵法）找出最佳配比表2方阵最适比测定抗体稀释度抗原稀释度1/101/201/401/801/1601/3201/6401/12对照1/5＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋±－－1/10＋＋＋＋＋

6、＋＋＋＋＋＋＋＋－－1/20＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－1/40－±＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－1/80－－－－＋＋＋＋－最适比：出现最强反应的Ag、Ab最高稀释度(Ag、Ab用量最少，反应最明显)二、免疫浊度测定(immunoturbidimetry)光学测量仪器、自动化分析仪器应用于沉淀反应定量检测：微量抗原、抗体，药物，小分子的半抗原1959年Schultze透射比浊法(transmissionturbidimetry)1967年Ritchie散射比浊法(nephelometry)1977年Sternberg速率散射比浊法(ratenephelom

7、etry)经典的沉淀试验有4个不足之处操作繁琐敏感度低（10～100μg/ml）时间长难以自动化70年代出现了微量免疫沉淀测定法免疫透射浊度测定免疫散射浊度测定法免疫胶乳浊度测定这3种技术皆已常规用于多种临床体液蛋白的检测，并已创造出了多种自动化仪器免疫浊度测定基本原理Ag、Ab在特殊缓冲液中快速形成复合物，使反应液出现浊度当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出被检物的含量免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种透射比浊仪测定（transmissionturbidime

8、terymeasure）散射比浊仪测定（nephelometrymeasure）透射比浊法1959年Schultze透射光