第6章 高效液相色谱分析法ppt课件.ppt

《第6章 高效液相色谱分析法ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第六章高效液相色谱分析法第一节高效液相色谱的特点与仪器第二节主要分离类型与原理第三节液相色谱的固定相与流动相第四节影响分离的因素与操作条件的选择第五节离子色谱法第六节超临界色谱第七节高效毛细管电泳第一节　高效液相色谱的特点与仪器一、高效液相色谱仪二、流程及主要部件三、高效液相色谱法的特点一、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph三、流程及主要部件（一）.流程（二）.主要部件1高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是

2、高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性往复式柱塞泵(恒流泵）(2)气动放大泵（恒压泵）2梯度淋洗装置外梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。内梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。3　进样装置流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：4　高效分离柱柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。5液相色谱检测器（1）.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点

3、：灵敏度高；线形范围宽；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。缺点:对紫外光完全不吸收的式样不能检测；同时溶剂的选择受到限制。（2）.光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。光电二极管阵列检测器（3）.示差折光检测器（differentialrefractiveindexdetector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；通用型检测器

4、（每种物质具有不同的折光指数）；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种；（4）.荧光检测器（fluorescencedetector）高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；三、高效液相色谱法的特点特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。气相色谱高效液相色谱只能分析挥发性物质，只能分析20%的化合物不能用于热不稳定物质的分析几乎可以分析各种物质可以用于热不稳定物质的分析用毛细管色谱可得到很高的柱效色谱柱不能很长，柱效不会很高流动相为气体，无毒，易于处理流动

5、相有毒，费用较高有很灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器（FID和TCD）没有较高灵敏的通用检测器运行和操作容易仪器制造难度较小运行和操作比GC难一些仪器制造难度大第二节主要分离类型与原理一、液-固吸附色谱二、液-液分配色谱三、离子交换色谱四、离子色谱五、离子对色谱六、排阻色谱七、亲和色谱(AC)一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatography固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；Xm+nSa======Xa+nSm

6、K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatography固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：（将

7、各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。三、离子交换色谱ion-exchangechromatography基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流动相：阳离子离子交换树脂作固定相