第4章 电泳技术ppt课件.ppt

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1、电泳技术目录第一节区带电泳第二节等电聚焦电泳第三节SDS-PAGE电泳第四节二维电泳第五节印迹技术第六节免疫电泳第七节高效毛细管电泳技术第八节电泳分析仪基本原理不同性质的质点，由于带电性质及电量不同，在一定电场强度下移动的方向和速度亦不同。蛋白质分子为两性电解质等电点pH>等电点带负电pH<等电点带正电质点所带净电荷量越多（介质的pH值离等电点越远）质点的直径越小越接近球形则它在电场中的泳动速度越快，迁移率亦越大。基本原理区带电泳检验医学中的应用－－血清蛋白电泳图6-1正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主

2、要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白Alb：清蛋白α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：运铁蛋白、补体系统、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE区带电泳图6-2几种常见异常血清蛋白图谱A：双清蛋白血清电泳图；B：慢性肝病或肝硬变常见的-融合的桥连现象；C：免疫球蛋白寡克隆增生型；D：M蛋白血清型（IgA型）；N：正常对照血清；P：患者血清ABCD区带电泳检验医学中的应用－－同工酶电泳图6-3LDH同工酶区带电泳图谱左：5份血清iso-LD

3、H电泳图；右：iso-LDH电泳示意图第一节区带电泳检验医学中的应用－－同工酶电泳图6-4CK同工酶示意图左：血清iso-CK电泳图，3示正常血清（CKMB<5%），1、2、4示急性心梗（CKMB>5%）；4示CKBB阳性；右：iso-CK电泳图谱示意图区带电泳实验原理让pH>pI（max）所有蛋白质带负电各种蛋白质带电量不同电泳速度不同经过一段时间电泳后，各种蛋白质被区分开区带电泳图6-1正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白Alb：清蛋白

4、α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：运铁蛋白、补体系统、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE第二节等电聚焦电泳检验医学中的应用－－次级同工酶的分离图6-5碱性磷酸酶同工酶等电聚焦电泳图谱左：iso-ALP等电聚焦示意图；右：胆道梗阻性疾病iso-ALP电泳图谱第二节等电聚焦电泳区带电泳的原理是不同的蛋白质有不同的电泳速度那么可不可以有另外一种方法：使得不同蛋白质在泳道中本来就有“固定”位置，蛋白质在相应的位置上停留？蛋白质如何能够停止电泳？除了切断电源之外？蛋白质不带电

5、了——蛋白质处于等电点溶液中第二节等电聚焦电泳基本原理在等电聚焦电泳时必须有一个稳定的pH梯度介质，使pH值从正极向负极渐次增加，形成一线性pH梯度。蛋白质混合物加入有pH梯度的电泳管中，在电场中经一定时间后，混合物中各组分将分别聚焦在与各等电点相应的pH介质区域，形成分离的各种蛋白质区带。这就是等电聚焦电泳分离蛋白质的基本原理。第三节SDS-PAGE电泳等电聚焦根据等电点将蛋白质分离那还能不能根据其他性质将蛋白质分离?区带电泳的电泳速度的影响条件较多（大小、电荷、形状），不是根据单一性质分离有一种方法能根据蛋白质的分子量使之

6、带上相应的电荷，远远大于蛋白质本身电荷的大小，并使电荷成为电泳速度的主要决定因素，那么电泳速度只和分子量相关第三节SDS-PAGE电泳SDS是一种阴离子表面活性剂，能使蛋白质负载了大量负电荷，大大超过了天然蛋白质的原有电荷，因此蛋白质之间原有电荷的差异就无显著效应，蛋白质带电量的多少，只与蛋白质大小即分子量有关，此时，不同泳动速率仅反映了各蛋白质亚基的分子量的差别。第三节SDS-PAGE电泳检验医学中的应用－－非浓缩尿蛋白电泳图6-7非浓缩尿蛋白电泳示意图第三节SDS-PAGE电泳检验医学中的应用－－非浓缩尿蛋白电泳图6-8临

7、床常见蛋白尿电泳图谱左：肾小球性蛋白尿；中：肾小管性蛋白尿，泳道4示混合性蛋白尿，肾小管性蛋白尿为主型；右：混合型蛋白尿一个条带中仍是混合着多种蛋白质，如何再把它们分开呢？第四节二维电泳图6-9二维电泳原理及流程图第四节二维电泳基本原理第一维电泳，即等电聚焦电泳(isoelectricfocusing，IEF)其基本原理是利用蛋白质分子等电点的不同对其进行分离；第二维电泳，即SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，使电泳迁移率主要取决于蛋白质或亚基分子量的大小。第四节二维电泳检验医学中的应用一个问题：如何确定某个条带是

8、什么蛋白质？图6-1正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白第五节印迹技术免疫印迹法－－基本原理图6-13免疫印迹法的原理第五节印迹技术免疫印迹法（Immunoblotting）又称蛋白质印迹