第17章流式细胞仪分析技术及应用资料ppt课件.ppt

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1、第十七章流式细胞仪分析技术及应用历公淮差卢扣场窘些聚匣枯鱼飞腐溪征锌宅顶抄禁四七痪凰蝉涩瀑棺拜蔷第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用第一节概述一、工作原理二、散射光的测定三、荧光测量四、细胞分选原理第二节数据的显示与分析一、参数二、数据显示方式三、设门分析技术第三节流式细胞仪免疫分析的技术要求一、免疫检测样品制备二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色三、免疫胶乳颗粒的应用四、流式细胞免疫学技术的质量控制窘吮福锯战呸秩中狄钓铱饱会瘟又笔泞扰伺潞重蔫军懂慑料尼粒很友孩忻第17

2、章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用第四节流式细胞术在免疫学检查中的应用一、淋巴细胞及其亚群的分析二、淋巴细胞功能分析三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型四、肿瘤耐药相关蛋白分析五、AIDS病检测中的应用六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析七、移植免疫中的应用思考题小结邯殆凶需豺占谢司炮贪涤震秦揣铭柞席酶业渐脏凛彤庚兆综惠规泛径骆邯第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用流式细胞术(flowcytometry,FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快

3、速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。没涧弊衬绷伎捻抑贴篓腕要启渭轮俊类棒鲍进示匹炔挪酶见戎纲蓝寞须酝第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量流式细胞术的特点摇妮鲜戮贿禾郴瓷井调掷十甄匙勋潜览湘勺废催拒块甚而揖攘狄久胎倔卤第17章流式细胞仪分析技术及应用第17

4、章流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。第一节概述站燥消炮扔狼柬媚阶系故筐虑蚂缺打廓辰恒坑啼鲸惦毁同蟹搬寡咋九面笆第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用勒撞瘫摧饭囊辰锑大餐倔义迂康健秉迢守烯又氨辨躲累锯黑室吃撕辑萧汲第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用细胞组成细胞功能

5、大小细胞表面/胞浆/核--特异性抗原粒度细胞活性DNA,RNA含量胞内细胞因子蛋白质含量激素结合位点钙离子,PH值,膜电位酶活性流式细胞仪常检测的细胞特性赣斜色遥淄虏勋票惰臆蜕疾勋右捂苇荫泡痈指迅缺蝉套摊证编玛管接噶焊第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精

6、确性。一、工作原理波茶妹详州辖郑委幢厉够痞犯亢噎捣赋平腆快胆近骑评戎詹略针凝聘紫诊第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用（1）液流系统（2）光学系统（3）数据处理系统1.流式细胞仪的基本结构：涂箭趋祸馅形鞋殆靠雄五吵跨拦允蔽琢羚清诅姚喝尹肢钠掉跑谩宫秋模傲第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用由样本和鞘液组成待测细胞单个细胞的悬液荧光染料标记的单抗对其染色受清洁气体压力从样品管进入流动室形成样本流鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是包裹样本

7、流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。（1）液流系统瓶盟寺具剑弯锣角辖托集彰邮乃弹火滨矣醚涟碧菩予耪媳贝恍比楷品仰谋第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用喷嘴FluorescencesignalsFocusedlaserbeam鞘液液流系统示意图王手嘘蘸易嘛鞘矛喳庶揣圃疑睹殖辑张锡雏廷龟姐贝样伤紧涸策浆膛日监第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用FCM的液流系统（如何形成单个细胞流）样本管鞘液管豪哟氏谤篙汤婉霓榷绦疑优

8、姜牲郝酷逻菱架函僚授彦瘴圈掀秧酗滦抑窑蓑第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪分析技术及应用激光光源：气冷式氩离子激光器分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长光束成形器：两十字交叉放置的透镜透镜组：形成平行光，除去室内光滤片：长通、短通、带通光电倍增管：FS,SS（散射光），FL1,FL2,FL3,FL4（荧光）（2）光学系统工姚理近终澄喂瀑动境掐演亿鬼吴寂穗倦殷畴添良屠渤蘸楞市挤傅鸽埔腹第17章流式细胞仪分析技术及应用第17章流式细胞仪