稻曲病菌分子检测技术规程编制说明.doc

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1、湖南省地方标准《稻曲病菌分子检测技术规程》编制说明一、任务来源稻曲病菌无性态为Ustilaginoideavirens,属半知菌亚门、腔孢纲、瘤座孢目、绿核菌属,病原有性阶段有性态为Clavicepsoryzaesativae,属子囊菌门、子囊菌纲、麦角菌属、稻麦角菌。稻曲病的发生分布较为广泛,在中国、日本、美国、缅甸、印度、菲律宾等近40个国家均有发生。国内江南、华南、西南及东北稻区已有该病的发生报道。湖南稻区中、晚稻稻曲病发生普遍,尤以中稻发生严重。稻曲病主要危害水稻穗部,在水稻谷粒上形成稻曲球,影

2、响水稻的产量和稻米品质。稻曲病不仅严重危害病粒本身,而且病害的扩展会造成邻近谷粒的养分运输不畅,进而影响周围谷粒的发育和成熟,造成部分小穗败育而形成秕谷粒。同时,稻曲球中含有多种毒素,对人、动植物的生长发育具有显著的毒害作用。稻曲病的发生流行与多种因素有关,主要包括品种、田间菌源量、气候条件及栽培管理措施等。研究表明,田间及种子带菌量与稻曲病的发生有显著的相关性。由于缺乏对土壤以及种子中的菌源量检测的相关技术和标准,致使稻曲病发生异常严峻。为了实现对土壤以及种子中的稻曲病菌的快速检测,湖南省农业农村厅2

3、019年提出了《稻曲病菌分子检测技术规程》地方标准制定申请,并于2020年获省市场监督管理局批准,湖南省地方标准《稻曲病菌分子检测技术规程》列入2020年度湖南省地方标准制修订项目计划(湘市监标函[2020] 21号),由湖南省植物保护研究所组织编写与制定。2020年,湖南省植物保护研究所成立了标准起草组。标准起草组制定了工作计划并召开了首次起草组工作人员会议,讨论了修订要点,确定了工作任务,明确了工作时间进度。省市场监督管理局积极协调湖南省植保所开展标准制定工作,并且聘请了湖南省标准化协会作为技术支撑

4、单位,参与了标准制定全过程。按照《稻曲病菌分子检测技术规程》的技术内容、工作进度计划等要求,结合稻曲病菌分离、鉴定以及病害防控的经验成果,在此基础上编写了《稻曲病菌分子检测技术规程》地方标准草案。4二、标准制定的目的和意义目的:制定本项标准,旨在建立快速、灵敏、准确及可操作性强的水稻种子及土壤中携带稻曲病菌的PCR检测方法。意义:建立的田间土壤以及种子携带稻曲病菌检测方法,为明确稻曲病菌对水稻整个生育期的影响及病害的初侵染来源等提供技术支持,为健康水稻种子的生产和调运提供保障,该规程的应用,对于保障粮食

5、生产,促进水稻产业发展具有重要意义。三、编制原则和依据(一)编制原则1、科学性原则标准制定过程中充分收集各方面的意见,标准中的DNA提取、PCR扩增都有翔实的试验数据,以国家强制性规范要求做依据,确保指标的设置具有科学性。2、可靠性原则统一规范了DNA提取、引物设计、PCR扩增、仪器试剂及档案管理等指标要求,在具体操作上实施了统一的标准,保证样品检测的可靠性。3、实用性原则制定注重实用性,标准主要技术指标来源于生产实践,并经提炼论证,具有科学性、实用性和指导性。标准的构成严谨合理,内容编排、层次划分等符

6、合逻辑与规定。4、可操作性原则标准详细描述了各项技术流程,操作简便,具有较强的可操作性。(二)编制依据标准编写遵循GB/T1.1-2009《标准化工作导则第14部分:标准的结构和编写》编写要求,坚持引用最新的国家标准。在指标的选取上,参考了相关的国家标准、行业标准及当地部分企业的企业标准,做到了规范性技术要素和技术指标选取科学合理、有据可依。主要引用的规范性文件如下:GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法四、编制过程地方标准2020年3月立项批复后,4月开始了标准起草筹备工作,由湖南省植物保护研究

7、所主导地方标准的起草任务。抽调本所标准化工作人员,与湖南省标准化协会共同组成标准制定工作小组,承担《稻曲病菌分子检测技术规程》的制定起草工作。起草编制过程如下:(一)前期试验2020年4月-2020年6月,搜集了不同地区土壤以及水稻种子,提取了DNA,验证了引物的特异性和灵敏性,完成了样品的收集以及检测前期工作,为制定标准提供了坚实的科学数据基础。(二)指标检测2020年7月-2020年8月,开展了样品的PCR检测,初步形成了稻曲病菌快速分子检测技术规程,构建了标准草案的框架。(三)标准起草2020年4

8、月成立标准编制组,由来自湖南省植物保护研究所的专家和技术人员组成,共同讨论了稻曲病菌样品收集、DNA提取、PCR检测等技术方面的意见,认真听取专家对标准制定的建议,起草完成《稻曲病菌分子检测技术规程》初稿。2020年8月份,标准编制工作组根据标准草案进行研讨完善,形成了标准征求意见稿。五、标准主要技术内容说明(一)框架结构《稻曲病菌分子检测技术规程》由9章和2个规范性附录组成,基本框架为范围、规范性引用文件、术语和定义、原理、仪器设备与试剂

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