饲料中色氨酸的测定 微波水解-氨基酸自动分析仪法征求意见稿.doc

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1、ICS 65.120B46     DB15内蒙古自治区地方标准DB15/TXXXX—XXXX     饲料中色氨酸的测定微波水解-氨基酸自动分析仪法DeterminationoftryptophaninfeedsMicrowavedigestion-aminoacidautomaticanalyzermethod    点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（本稿完成日期：）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施内蒙古自治区市场监督管理局   发布DB15/TXXXX—XXXX前  言

2、本标准是按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。本标准由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。本标准主要起草人：宋洁、姚一萍、敖长金、王丽芳、史培、冯小慧、王雪娇、狄彩霞、景宇鹏、张欣昕、张三粉、羿静、钟华晨、郭晨阳。IDB15/TXXXX—XXXX饲料中色氨酸的测定微波水解-氨基酸自动分析仪法1　范围本标准规定了饲料中色氨酸含量测定的微波水解-氨基酸自动分析仪法。本标准适用于饲料原料、配合饲

3、料、浓缩饲料和精料补充料中色氨酸的测定。本方法定量限为0.05%。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6433饲料中粗脂肪的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备标准3　原理饲料中色氨酸经微波碱水解后，从蛋白链中释放出来，经氨基酸自动分析仪测定色氨酸含量。4　试剂与材料如无特别说

4、明，所用试剂均为分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。4.1　试剂4.1.1　氢氧化钠（NaOH）。4.1.2　盐酸（HCl）:浓度≥36%，优级纯。4.1.3　氮气：纯度99.9%。4.2　试剂配制4.2.1　氢氧化钠溶液（5mol/L）：称取200g分析纯氢氧化钠，溶于200mL水中，冷却至室温后，用水稀释至1000mL，混匀。4.2.2　氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：称取0.40g分析纯氢氧化钠，溶于100mL水中，混匀。4.2.3　盐酸溶液（6mol/L）：取500mL优级纯盐

5、酸加水稀释至1000mL，混匀。4.3　标准品L-色氨酸标准品：固体，纯度≥99%。4.4　标准溶液配制5DB15/TXXXX—XXXX1.1.1　L-色氨酸标准储备液：精确称取色氨酸标准品20.4mg，加适量水和数滴0.1mol/L的氢氧化钠（4.2.2）溶解，用水定容至100mL，浓度为1.0μmol/mL，4℃冷藏保存，有效期1个月。1.1.2　L-色氨酸标准工作液：准确吸取1.0mL色氨酸标准储备溶液于10.0mL容量瓶中，用水稀释至刻度，该浓度为0.1μmol/mL，为色氨酸标准上机液，

6、4℃冷藏保存，有效期2周。2　仪器与设备2.1　氨基酸自动分析仪：茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪。2.2　微波水解仪：温度可达到170℃。2.3　分析天平：感量分别为0.01g和0.0001g。2.4　离心机：转速不低于10000r/min。2.5　聚四氟乙烯水解管：耐碱耐热、密封性良好，容积为55mL。3　分析步骤3.1　试样制备参照GB/T14699.1选取有代表性试样，四分法缩减取样。按GB/T20195制备试样，粉碎后过0.25mm孔径筛，充分混匀后装入密封容器中备用。脂肪含量>4%的样品，

7、参照GB/T6433先进行脱脂处理。3.2　试样水解准确称取50~100mg（精确至0.0001g）脂肪含量<4%的样品，置于聚四氟乙烯水解管（5.5）中，加5mL氢氧化钠溶液（4.2.1），充氮气1min，旋紧密封盖后放入微波水解仪（5.2）中进行微波水解，功率1200w，升温时间10min，水解温度170℃，水解时间30min。取出水解管，冷却至室温，将水解液转移至25mL容量瓶，用6mol/L盐酸（4.2.3）中和，使pH至中性，并用水定容至刻度，10000r/min离心10min，用0.4

8、5μm滤器过滤后上氨基酸自动分析仪测定（5.1）。3.3　参考色谱条件氨基酸自动分析仪参考工作条件和洗脱梯度见表1和表2。表1氨基酸自动分析仪参考工作条件仪器条件仪器参数色谱柱LCAK06/Na（4.6×150mm）流动相柠檬酸钠A:0.12mol/L,pH=3.45;B=0.2mol/L,pH=10.85检测波长（nm）570流动相流速（mL/min）0.45茚三酮流速（mL/min）0.25反应器温度（℃）130柱温（℃）74进样体积（μL）505DB15/TXXXX—XXXX