DB37T 4043-2020 生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-柱后光化学衍生法.doc

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1、ICS 67.050X04     DB37山东省地方标准DB37/T4043—2020     生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定　液相色谱-柱后光化学衍生法DetectionofaflatoxinB1、B2、G1、G2、M1、M2contentsinrawmilkbyliquidchromatographywithpost-columnphotochemicalderivatization2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局   发布DB37/T4043—2020前  言本标准按照GB/T1.1—

2、2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农科院农业质量标准与检测技术研究所、青岛农业大学、青岛农业大学海都学院。本标准主要起草人：王玉涛、韩荣伟、于忠娜、蔡达、徐宁、张潇、高磊、赵玉华、刘俊华、秦宏伟、邱慧玲、王军、盖学武、焦霞、杨永新。4DB37/T4043—2020生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定　液相色谱-柱后光化学衍生法警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应避光(阳光)，具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在整个实验过程中，操

3、作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施。1　范围本标准规定了测定生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2含量的液相色谱-柱后光化学衍生测定方法。本标准适用于生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的定量测定。本标准方法的检出限：黄曲霉毒素B1为0.002μg/kg，黄曲霉毒素B2为0.002μg/kg，黄曲霉毒素G2为0.002μg/kg，黄曲霉毒素G1为0.002μg/kg，黄曲霉毒素M1为0.005μg/kg，黄曲霉毒素M2为0.002μg/kg；本标准方法的定量限：黄曲霉毒素B1为0.006μg/kg，黄曲霉毒素B2为0

4、.005μg/kg，黄曲霉毒素G2为0.005μg/kg，黄曲霉毒素G1为0.006μg/kg，黄曲霉毒素M1为0.015μg/kg，黄曲霉毒素M2为0.006μg/kg。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3　原理试样中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2用甲醇溶液提取，提取液经黄曲霉素毒素免疫亲和柱净化、富集，用高效液相色谱分离后经柱后光化学衍生，荧光检测器检

5、测，外标法定量。4　试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T6682中规定的一级水。4.1　甲醇：色谱纯。4.2　乙腈：色谱纯。4.3　甲醇水溶液：取50mL甲醇，加入50mL纯水，混合均匀。4.4　流动相：乙腈+水=20+80。分别取200mL乙腈，800mL水，混合均匀，并脱气备用。4.5　黄曲霉毒素（B1、B2、G1、G2、M1、M2）标准储备溶液：采购市售标准溶液，分别用甲醇配成100ng/mL的标准储备液。储备液于-4℃避光保存（有效期三个月）。4.6　免疫亲和柱：柱容量≥100ng(柱容量、回收率、柱回收率验证方法

6、参见商品说明书)。注：对于每个批次的亲和柱在使用前需进行质量验证。4DB37/T4043—20201.1　滤膜：0.45μm有机滤膜。2　仪器设备2.1　液相色谱仪：荧光检测器。2.2　光化学衍生装置。2.3　分析天平，感量0.01g。2.4　固相萃取装置。2.5　旋涡混合器。2.6　冷冻离心机：转速不小于10000r/min。2.7　氮吹仪。3　测定步骤3.1　提取称取20g样品，精确到0.01g，置于50mL的离心管中，加入10mL甲醇，涡旋5min，以10000r/min的转速在-5℃条件下于冷冻离心机离心10min，取上清液加水定容至50mL，备用

7、。3.2　净化将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温，待免疫亲和柱内的液体放弃后，将上述样液移至50mL注射器筒中，控制流速为1mL/min～3mL/min。待样液滴完后，往注射器筒内加入10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱后，吹干亲和柱。加入2×2mL乙腈(或甲醇)洗脱亲和柱，控制流速为1mL/min～3mL/min，吹干亲和柱，收集全部洗脱液至刻度试管中。在50℃下氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，用初始流动相定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.45μm有机滤膜过滤，供液相色谱测定。3.3　标准曲线配置用流动相（4.4）将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

8、、M1、M2稀释成0.1ng/mL～10.0ng/mL的系列标准溶