第03章显微镜教学指导.doc

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1、第三章显微镜首页基本要求重点难点讲授学时内容提要1．基本要求1.1了解(1)了解显微镜技术的产生和发展现状(2)了解光学显微镜的常见故障及其排除方法1.2熟悉(1)熟悉临床常用显微镜的临床应用(2)熟悉光学显微镜的维护、调试与使用方法(3)熟悉扫描隧道显微镜的基本原理及特点(4)熟悉电子显微镜的临床应用1.3掌握(1)掌握光学显微镜的性能参数、基本原理和基本结构(2)掌握常用显微镜的基本原理、结构和特殊部件(3)掌握电子显微镜的类型和组成(4)掌握透射和扫描电子显微镜的基本原理及特点。2．重点难点2.1重点(1)光学显微镜的光学参数、基本原理和基本结构

2、(2)临床常用显微镜的基本原理、结构和特殊部件(3)临床常用显微镜的性能、用途(4)光学显微镜的调试与使用方法(5)电子显微镜的类型和组成(6)透射电子显微镜、扫描电子显微镜、扫描隧道显微镜的基本原理及特点2.2难点(1)临床常用显微镜的基本原理、结构和特殊部件(2)光学显微镜的性能参数(3)透射电子显微镜、扫描电子显微镜、扫描隧道显微镜的基本原理及特点3．讲授学时建议10~12学时4．内容提要4.1光学显微镜4.1.1光学显微镜的工作原理光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，供人们提取物质微细结构信息的光学仪器。显微镜是由两组

3、会聚透镜组成的光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜（objectlens），而焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜（ocularlens）。而相对于物镜的成像条件及最后二次成像于观察者的明视距离等条件的满足是通过仪器的机械调焦系统来实现的。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作第二级放大，得到最大放大效果的倒立的虚像，位于人眼的明视距离处。4.1.2光学显微镜的基本结构光学显微镜的基本结构包括光学系统和机械系统两大部分。光学系统是显微镜的主体部分，有包括物镜、目镜、聚光镜及反

4、光镜等组成的照明装置。机械系统是为了保证光学系统的成像而配置的，包括调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件。一些特殊类型或高级显微镜还有一些附加装置。显微镜基本结构示意图4.1.3光学显微镜的性能参数放大率:显微镜的放大率(amplification)或称放大倍数是指显微镜经多次成像后最终所成(放大的)像的大小相对于原物体大小的比值。数值孔径：数值孔径(numericalaperture)又叫镜口率，是物体与物镜间媒质的折射率n与物镜孔径角的一半(β)正弦值的乘积，通常缩写为NA。分辨率：显微镜的分辨率(disting

5、uishability)又称为分辨本领(resolvingpower)，是指透镜能分辨两点之间的最小距离。视野：视野(visualfield)又称视场(field)，是指通过显微镜所能看到标本所在空间的范围。景深与焦长：景深(depthoffield)又称焦点深度，是指在成一幅清晰像的前提下，像平面不变，景物沿光轴前后移动的距离称“景深”。景物不动，像平面沿光轴前后移动的距离称“焦长”。镜像亮度和清晰度：镜像亮度即显微镜的图像亮度的简称。镜像清晰度是指图像的轮廓清晰、衬度适中的程度。工作距离：工作距离是指从物镜前表面中心到被观察标本间满足工作要求的距离

6、范围，与物镜的数值孔径成反比。4.2电子显微镜4.2.1电子显微镜的基本结构电子显微镜主要由电子光学系统、真空系统、供电系统、机械系统和观察显示系统等几部分组成。电子光学系统主要由电子透镜和电子枪组成。真空系统主要由机械泵、油扩散泵或离子泵、联动控制阀门、真空排气管道、空气过滤器和用于真空度指示的真空测量规等组成。供电系统包括高压电源、真空系统供电电源、透镜电源、辅助电源及安全保护系统的电源等。机械系统包括电镜座、标本室、磁屏蔽外壳、镜筒、制冷系统及控制工作台等。观察显示系统由荧光屏和照相室两部分组成。4.2.2电子显微镜的分类及其应用透射电子显微镜：

7、透射电子显微镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备更薄的超薄切片（通常为50～100nm）。在生物医学中主要用于观察组织和细胞内的亚显微结构、蛋白质、核酸等大分子的形态结构及病毒的形态结构等，另外，透射电镜还是区分细胞凋亡与细胞坏死最可靠的方法。细菌细胞结构，鞭毛结构，放线菌的孢子结构及孢子表面装饰物立体形状等超微结构的观察，都需用透射电子显微镜。透射电子显微镜的实体图扫描电子显微镜：扫描电子显

8、微镜的工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入