仪器分析 第17章-HPLCppt课件.ppt

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1、第17章高效液相色谱法(HPLC)1HPLCHighPerformanceLiquidChromatography17.1概述17.2高效液相色谱仪17.3高效液相色谱的固定相和流动相17.4高效液相色谱法的主要类型217.1概述17.1.1色谱法的提出MichaelTswett研究植物色素分离提出色谱法的概念A+BA+BBAABtScolorchromatographychromagraphein希腊语towrite317.1.1HPLC的发展历史1941Martin和Synge提出液-液色谱理论；1952James和

2、Martin发展了气相色谱；1956VanDeemter提出速率理论；1967Kirkland等研制高效液相色谱法；吸附柱色谱1906GC1950年代GC-MS1950年代末HPLC1960年代毛细管电泳和毛细管电动色谱等一系列新的色谱法1980年代中期4HP1100型高效液相色谱仪517.1.2HPLC与GC、经典LC的比较气相色谱（GC）只适合分析在操作温度下能气化而不分解的有机化合物，仅占15%，衍生后也只有不到20%。GC不适用于高沸点、难挥发及热不稳定化合物、离子性化合物、高聚物等。617.1.2HPLC与GC

3、、经典LC的比较7HPLC：高效色谱柱、高压泵、高灵敏检测器17.1.2HPLC与GC、经典LC的比较经典LC：粒径150-200μm，流速0.xml/min，分离时间数小时（依重力流动）817.1.3现代高效液相色谱法的特点：(1)高效：(2)高压：HPLC工作压力高达20MPa-30MPa。(3)高速：分离一个样品只需几分钟至几十分钟。(4)高灵敏度：紫外检测器的检测限可达10－9g，荧光检测器的检测限可达10－11g。一般GC的填充色谱柱是数千塔板／米，高效液相色谱法的塔板数可达约8万塔板/米，使分离效率大大提高。

4、9用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析的方法称为高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography,HPLC)。17.1.3HPLC定义10高效液相色谱法的优点是：其缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，流动相消耗大且有毒性的居多。17.1.3高效液相色谱法的优、缺点检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精

5、度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、具有生物活性、热稳定性差的化合物。1117.1.4高效液相色谱法理论基础液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。12n为色谱柱的理论塔板数。因为tR是热力学常数，当色谱柱的长度一定，理论板数目n越大，色谱峰越窄。17.1.4液相色谱的塔板理论2212254516)(.)()(/WtWttnRbRR===σ2212254516)(.)()(/'''WtWttnRbRRef

6、f===σ13式中u—流动相流动的线速度液相色谱的速率方程：17.1.4液相色谱的速率理论uCuBAH++=14液相色谱的速率方程为：D为扩散系数，Cd、C’为有关项的板高系数，dp和df为填充粒子直径和固定液膜的厚度17.1.4液相色谱的速率理论1517.1.4液相色谱的速率理论H∝d2p当粒度从45μm降至6μm时,板高要降低10倍。16二、液相色谱的速率理论H∝d2p当粒度从45μm降至6μm时,板高要降低10倍。17提高柱效的方法(降低板高)：①固定相填料要均一，颗粒细，装填均匀。②流动相粘度低。③低流速。④适当

7、升高柱温。17.1.4液相色谱的速率理论液相色谱速率方程，指出了提高柱效率的途径。1817.1.5色谱分离的过程1917.1.6样品分子在色谱柱中的分离过程2017.1.6色谱分离的实质2117.1.7高效液相色谱法的分离机理及分类吸附色谱分配色谱尺寸排斥色谱离子交换色谱吸附能，氢键疏水分配作用溶质分子大小库仑力类型主要分离机理所用固定相化学键和固定相多孔凝胶离子交换剂吸附剂（氧化铝）2217.1.7高效液相色谱法的分离机理及分类液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或

8、多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。2317.1.7离子交换色谱(Ion-exchangechromatography)的分离原理24高效液相色谱的应用：医药卫生、食品、人体化学成分、各类合成