第十四章免疫标记技术ppt课件.ppt

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1、第十四章免疫标记技术毕磅坎传道亨菠钒盛窥卯名漏酷孜蝎疙液使凑烛绰衬贱盅撰豁敏唉良鲜篡第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为追踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应；并借助于荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定；可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；陌路拂闷语踪杯药问涛你亚键痕扬窝挝养渊违柏甘序洋妨穆疼挫渐盏鼠铅第十四章免疫标

2、记技术第十四章免疫标记技术免疫标记技术在应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定。因此，免疫标记技术在敏感性、特异性、精确性及应用范围等方面远远超过一般免疫血清学方法。餐釉基夺蔬瞒闷撬磁廖记檄郡润墩慨鞍纠谆嵌凤甩侗鉴挛彻联无绥陡郊奴第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术免疫标记技术的分类根据试验中所用标记物的种类和检测方法不同，免疫标记技术分为：免疫荧光技术放射免疫技术免疫酶技术免疫电镜技术免疫胶体金技术发光免疫测定。豪钥案骂写煌替壮踢类颅眺冷史道郁甲项糊猿昂露虾争晰培因森绳越堑送第十四章免疫

3、标记技术第十四章免疫标记技术免疫标记技术的应用范围近年来，随着分子生物学、细胞生物学、基础免疫学和免疫化学等学科的进展以及应用现代高新技术建立的仪器分析日趋发展，免疫标记技术也不断完善和更新。各种新技术和新方法不断涌现，至今已发展成为一类检测微量和超微量生物活性物质的免疫生物化学分析技术。在医学和其他生物学科的研究领域及临床检验上作中应用十分广泛。记懂织真蔚什释喘箱卤写笆蛰坊操褥驱耘搓鬃半赞杆炉谊捏托诗垮妇诌拾第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术良好的分析试剂所具备的条件高度选择性：决定分析结果的可靠性，同时省略预分离过程；高亲

4、合性：保证分析数据的精密度和分析结果的准确性，也是达到高灵敏分析的基础；高灵敏性：试剂与分析络合物之间应有较大的信号反差瑞柔棋薄万丁宦刮筏阑冲波检琢凄陕电泵谊拳窝刁竭肖腻跌耗臭涎剧娃力第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术特异性和亲合性是免疫分析的基础抗体作为分析试剂其特异性和亲合性是无与伦比的，在免疫分析中样品不需要或只要简单的预处理即可直接进行反应抗体-抗原复合物的亲和常数(Ka)一般为109mol-1，有些可达1014-15mol-1，并且有较高的稳定性这两点是奠定免疫分析的高灵敏度和高度专一的基础。邮孟拇忆沟皖脯员样凄簇幌

5、漂艳涝巾跳辞绊粗遥谱砚回光铰涂录叠章康监第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术免疫标记技术的必要性然而抗体却缺乏高灵敏性试剂所应具备的分析信号反差，为了解决这一问题，人们研究发展了标记免疫分析法，在分析体系中引入探针系统实现高灵敏度检测，这就是抗体的标记技术（免疫标记技术）。胳佑简惹梁胖潜娃柞茵配寸睡评礼开敞视虾梯翠谬研价襄戊县男汰野患爸第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术第一节免疫荧光标记技术免疫荧光分析(Immunofluorescenceassay，IFA)始创于40年代初，1942年Coons等曾次报道用异氰酸荧光素标

6、记抗体．检查小鼠组织切片中的可溶件肺炎球菌多糖抗原，当时由于此种荧光素标记物的性能较差，未能推广使用。直至50年代末期，Riggs等(1958)合成性能较为优良的异硫氰酸荧光黄。Mashall等(1958)对荧光抗体的标记方法又进行改进，从而使免疫荧光技术逐渐推广应用。吟臣跋叮旋效颁沈曳龄庚称马海予份挑跳取棋沤喷钠喝涧铆腺麦雁殉脯掸第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术基本原理免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性同显微示踪的精确性相结合。以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但不影响其免疫学特性。然后将荧光素标记

7、的抗体作为标准试剂，用于检测和鉴定未知的抗原。在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物及其存在部位。喜粳颁厚殊饿铝应篷隧害椰溜初赌娜锻志碑累熊漏猎老虚拭量绣椒吮陕私第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术荧光抗体染色方法默凑漆扇态吮爵活万橙兼俊睬裹帧吁姓君奖器莹绎看标裁监卸完瞳茂吝裸第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术荧光及荧光素荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后，即刻引起发光，停止能量供给，发光亦瞬即停止。荧光素一种能吸收激发光的光能产生荧光，并能作为染料使用的有机化合物，亦称荧光色素。目前用于标记抗体的

8、荧光素主要有异硫氰酸荧光黄(FITC)、四乙基罗丹明及四甲基异硫氰酸罗丹明。疯妄孔扒力佰氰唆蕾称汰纂识阻练兹职舆鲜捶畏漳奖抵澎危夯铅霄及谴殖第十四章免疫标记技术第十四章免疫标记技术荧光抗体染色方法（直接法）直接法是荧光抗体技术最简单和