生物选修1课堂教学课件微生物的分离与计数.ppt

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1、课题2、3——微生物的分离与计数2021/7/28高中生物选修1※专题2微生物培养与应用主要内容2021/7/28大肠杆菌的纯化培养；分解尿素的细菌的计数;分解纤维素微生物的分离。大肠杆菌的纯化培养1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水

2、定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落大肠杆菌的纯化培养倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）大肠杆菌的纯化培养平板划线法大肠杆菌的纯化培养问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼

3、烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。大肠杆菌的纯化培养6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3

4、个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍大肠杆菌的纯化培养⑴平板划线法：大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.接种：⑵稀释涂布平板法：2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并记录大肠杆菌的纯化培养菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃大肠杆菌的纯化培养复习分解尿素的细菌的计数尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为N

5、H3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3细菌脲酶分离产生脲酶的细菌分解尿素的细菌的计数筛选菌株提出的问题—如何寻找耐高温的酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境；原理—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，耐高温菌种提取耐高温酶。分解尿素的细菌的计数筛选菌株选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。分解尿素的细菌的计数筛选菌株KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。该培养

6、基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？?碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。分解尿素的细菌的计数统计菌落数目：1、活体计数法（稀释涂布平板）（1）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：1个菌落→1个活菌（3）统计原则①选30∼300个菌落的平板统计②每个稀释度取3个平板取其平均值为什么？分解尿素的细菌的计数统计菌落数目1、活菌计数法（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。每克样品中的菌

7、株数=（C/V)*MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。为什么？分解尿素的细菌的计数例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过

8、大，不应用于计算平均值?分解尿素的细菌的计数2、显微观察法：比例计数或直接计数（血球计数板）计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为：1mm、1mm和0.1mm计数室的容积：0.1mm3（万分之一毫升）取样：稀释一定倍数的菌液分解尿素的