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1、第24卷第4期应用化学Vol.24No.42007年4月CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRYApr.2007聚酰胺色谱法分离制备高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯王传金魏运洋3朱广军杜杨艳(南京理工大学化工学院南京210094)摘要绿茶的乙醇浸提液经浓缩、脱色和萃取,得茶多酚粗品,用聚酰胺层析柱分离提纯得(-)2EGCG单体。采用正交试验法考察了绿茶的粒度、乙醇用量和提取次数对(-)2EGCG提取率的影响,得出优化醇提工艺为:绿茶粉末粒径小于01960mm,用12倍量的体积分数为95%的乙醇溶液,回流提取3次,每次提取1h。研究了绿茶醇提液的活性炭
2、脱色工艺,考察了活性炭用量、脱色次数、脱色时间对脱色液的吸光度和(-)-EGCG提取率的影响,得出优化的脱色工艺为:加入绿茶用量36%的活性炭脱色2次,每次脱色30min。研究了茶多酚粗品的聚酰胺色谱法分离条件,考察了聚酰胺的粒度和上样量与聚酰胺的量比对(-)2EGCG提取率的影响。结果表明,当所用的聚酰胺的粒度为01170～01210mm,上样量与聚酰胺质量比为1∶50时,(-)2EGCG提取率达50%。通过对醇提、脱色和分离工艺的优化,1g绿茶可提取出0104g纯度大于9910%的(-)2EGCG单体。采用质谱、元素分析、紫外、红外、核磁共振和高效液相色谱等测试技术表
3、征了提取物的化学结构。关键词表没食子儿茶素没食子酸酯,聚酰胺,液相色谱,提取工艺,正交实验,活性炭中图分类号:O621.1文献标识码:A文章编号:10000518(2007)04044305表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)EGCG]是从绿茶中提取分离出来的生物活性成分,毒性低,具有抗氧化、降血脂、降胆固醇、防癌、抗癌、抑制细菌和病毒等生理药理活性,可广泛用于粮油、食品、药[1]()[2]品、精细化工等领域。-EGCG的提纯分离方法主要有sephadexLX20柱层分离,高效液相色谱法的制备分离[3]和高速逆流色谱分离[4]等。这些提取分离方法工艺流程长、提取过程中使用氯仿
4、或222222重金属等有毒物质,设备投资高,分离材料昂贵,限制了其在食品、粮油、医药等领域的广泛应用。本文采用聚酰胺柱层分离法制备高纯度的(-)2EGCG,与所报道的提取纯化工艺相比较具有工艺简单、所用溶剂无毒无污染、安全、价廉、溶剂和聚酰胺可重复循环使用等优点,适合工业化生产。1实验部分1.1仪器和试剂Waters600型高效液相色谱仪(HPLC)(美国);BRUKER(500MHz)核磁共振仪(德国),D2O作溶剂;FINNIGAN液2质联用仪(美国);UV21601型紫外分光光度仪(日本);VECTOR222型红外光谱仪(德国);WZZ22S数字式旋光仪;ALPHA
5、I26型冷冻干燥机(德国);CHN2O2Rapid元素分析仪(德国)。玻璃层析柱规格1200mm×40mm;聚酰胺粒径01170～01210mm;甲醇(色谱纯);乙酸乙酯(分析纯);乙醇(工业品),绿茶(安徽滁州市施集茶厂);实验用水为蒸馏水。1.2绿茶中(-)2EGCG的含量测定与提取率的计算取(-)2EGCG标准样用HPLC法测定浓度2峰面积标准线性方程如下[5]:Y=5586243.3X-125577.5式中,Y为峰面积(μV·s);X为(-)2EGCG的质量浓度(mg/L);方程的线性相关系数为1100;色谱条件:以V(CH3OH)∶V(H2O)=3∶7的混合溶剂
6、为流动相,检测波长为275nm,流速为1mL/min。2006205210收稿,2006209208修回通讯联系人:魏运洋,男,教授,博士生导师;E2mail:ywei@mail.njust.edu.cn;研究方向:药物中间体444应用化学第24卷参考文献[5]方法,称取10g/份的经粉碎过孔径为0960mm筛的绿茶粉末3份,置于3个圆底烧瓶中。分别加入体积分数为50%的乙醇溶液10mL,在水浴中恒温50℃回流提取2h,过滤。滤饼再按以上步骤重复提取2次。合并滤液,定容至50mL容量瓶中作为供试品液。用HPLC法测定峰面积,根据标准样的浓度峰面积标准线性方程计算绿茶中(-
7、)EGCG的质量分数(ω)为80%。221在后续醇提和脱色工艺研究中,每次取提取液或脱色液总体积的1/5,分别加入体积分数为50%的乙醇,定容至50mL容量瓶中作为供试品液;在聚酰胺柱层分离工艺研究中,每次取洗脱液80mL,分别加入体积分数为50%的乙醇,定容至100mL容量瓶中作为供试品液。用HPLC法测定各供试品液的峰,根据标准样的浓度峰面积标准线性方程计算供试品液中(-)EGCG的质量分数(ω′),按下式计面积1122算(-)2EGCG的提取率:(-)2EGCG的提取率(%)=ωω′×100%1.3聚酰胺的处理和装柱将5
