不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析讲解学习.ppt

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1、不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析二、实验原理正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保

2、存。亚达姆斯试验发现苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。维霍夫试验中，丁香的花粉贮藏在干燥器中，15d以后发芽率降到50％；至20d时，仅有个别花粉发芽；到30d时，即全部死亡。因此，暂时不用的花粉，应立即在适宜的条件下贮藏，妥善保存。为保持花粉生活力则人为采取减低其代谢强度，保持其纯洁性，将其贮存于低温、干燥、黑暗，并较为稳定的环境条件下，以保持其活力。三、实验材料、主要仪器和试剂1.材料：不同园艺植物，任选3种2.主要仪器：镊子、显微镜、

3、恒温箱、培养皿、烧杯、玻璃棒、量缸、电磁炉、标签、记号笔、离心管、冰箱、牙签、分析天平。3.主要试剂：琼脂、蔗糖、硼酸、无水CaCl2。（一）形态检测法⑴把具有品种典型性的花粉粒作为具有生活力的花粉；⑵把小的、皱缩的、畸形的以及没有内含物的作为没有生活力或具有较弱生活力的花粉。花粉置于载玻片上，滴上水，盖上盖玻片观察，然后自制表格进行记载。四、实验方法分别介绍（1）采集花朵选择正常的无病虫害的园艺植株上含苞待放正常的花朵，采集后带回实验室剔除过大及过小的以及一些叶子和杂质。（二）花粉萌发检测法（2）收集

4、花药及散粉用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中，写上标签，进行必要的加温处理（培养箱温度25℃使其散粉。（3）花粉的储藏散粉然后将花粉收集于2ml的离心管（花粉瓶）中，用封口膜密封盖子，写上标签置于冰箱（-20℃）内储藏备用。（或者不同温度25℃，5℃、0℃、-20℃、-40℃和-86℃下贮藏）。注意采集花药开裂前后的新鲜花粉，对不成熟的幼嫩花药的花粉，成熟过头的花粉被雨露粘湿的花粉，有疑问的花粉杂质要除去。（4）培养基的配制培养基的配制：琼脂量：7g/L，蔗糖

5、：15g/100mL（15%），调pH6.0，分装到培养皿中，凝固后即为花粉离体培养的发芽床。花粉培养为固体培养，琼脂需要的量是5g/L-7g/L，在琼脂中分别添加蔗糖、硼酸、氯化钙为参照因素，按照（三因素三水平）进行正交设计。按照设计进行配置培养基。因素水平11005010021501001503200150200表1因素水平表试验处理列号1（A）2（B）3(C)111121223133421252236231731383219332表2花粉培养正交试验正交表（5）撒播花粉取出花粉，用牙签沾取已经散好

6、的花粉轻轻均匀抖在培养基上，抖上之后先在显微镜下观察，要求每个视野内30～50个，避免成团影响观察效果。按要求撒好后用记号笔在标签上做标记（时间、品种、组别）放在25℃培养箱内进行培养，观察花粉管的萌发伸长。（6）观察培养1h，2h，3h，5h后进行显微镜观察,观察萌发的个数，每个培养皿观察3个重复，算出平均数，然后计算不同园艺植物不同贮藏条件下离体培养的花粉萌发率。萌发率（%）=（已萌发的花粉粒数目/花粉粒总数）*100%（7）结果统计表1材料1的花粉萌发率贮藏温度总数1总数2总数3总数平均数萌发1萌

7、发2萌发3萌发平均数萌发率常温-20℃（8）照片描述桃的花粉萌发率的观察桃的花粉萌发情况的观察桃的花粉萌发情况的观察杏梅的花粉萌发情况的观察1.碘-碘化钾染色测定法【原理】多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其 染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。（三）染色检测法【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】I2-KI溶液【步骤】采集成熟花药

8、，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。2.氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的TTF（