实验一MS培养基配制和灭菌.pdf

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1、实验一MS培养基配制和灭菌一．目的和要求：1.学会MS培养基的制作方法;2.掌握高压灭菌的方法和基本操作。二、仪器与试剂1.仪器：灭菌锅、解剖刀、枪状镊子、烧杯（500ml）、培养皿、移液管等2.试剂：MS的Macro-e、Micro-e、有机母液、Fe盐、肌醇蔗糖，琼脂粉，1NNaoH和1NHCl三、方法步骤（一）配方设计:以MS为基本培养基（mg/L）No.6-BANAAIBACK0010.50.121.00.132.00.241.00.252.00.2（二）配制培养基(1)溶化琼脂：量取300ml左右蒸馏水，加入4.8g琼脂粉，加热溶解直至完全融化。(2)各种母液的吸取：Macro

2、-e50mlMicro-e1ml有机成分1mlFe盐5ml肌醇10ml加在一起，倒入烧杯（1L)（3）加入糖:称取30g蔗糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。（4）根据实验设计，量取生长调节剂:加在一起，倒入烧杯。（5）定容:加蒸馏水（用量杯）。（6）调节pH至5.8，用pH试纸进行测定，用1molHcl或1MolNaoH调节。（7）分装:30～40ml/瓶6，培养基勿碰三角瓶口。（8）用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。（三）灭菌：用高压蒸汽消毒器灭菌，其压力为0.12～0.15MPa,温度为120～126℃，保持

3、15~20min。具体操作步骤：1.加水；2.把包扎好的培养基装入高压锅；3.盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀；4.加热；5.排除冷空气；6.排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到1Kg位置时，开始计算灭菌时间，一般在1Kg压力(121℃)下灭菌15~20分钟即可，但要注意保持稳定压力。7.灭菌时间达到20分钟后，停止加热，待压力自动降到0磅时，打开放气阀，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。四.作业1.总结配制培养基的注意事项。2.制作培养基前为何要提前配制母液?实验二短柄五加无性系建立一．目的和要求：1.学习并掌握外植体的消毒方法及具体

4、操作;2.掌握无菌操作技术。二、材料、仪器与试剂1.材料：短柄五加休眠枝短柄五加(EleutherococcusbrachypusHarms.)为五加科五加属灌木，在我国的分布范围极其狭窄，主要分布于西北黄土高原，逐渐被认为是濒危植物。其茎具有较高的药用价值，有治疗神经衰弱、妇女更年期综合症、继发性高血压、白细胞减少等功效。2.仪器：超净工作台、灭菌锅、弯头剪、枪状镊子、烧杯（500ml）、培养皿等3.试剂：配制好的MS培养基各种母液、1mol/L的NaOH、1mol/LHCL、0.1%的升汞、70%的乙醇。三、方法步骤(一)无菌操作准备阶段接种室：1、紫外灯提前照20-30min。2、

5、70%乙醇或新洁尔喷雾消毒。操作人员：1、穿专用实验服，戴口罩。2、剪短指甲，流水洗手三次。操作阶段1、清理工作台面，70%乙醇擦三次。2、70%乙醇擦手三次。3、避免说话和来回走动(二)无性系建立1.配制启动培养基CKMS①MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L②MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L③MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L④MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L⑤MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L2.材料的选择：选用的枝条要求表面光滑、无病虫害。3.培养步骤：（1）外植体消毒：去杂→流水水洗1～2h→70

6、%乙醇（8-10s）→无菌水洗3-5次→0.1%HgCl2（10min）→无菌水水洗5次（2）接种：用剪刀将灭菌后的枝条剪成长约1～1.5cm的单芽茎段。将茎段按其自然极性方向垂直插入培养基，每瓶只接一个。对接种用具、超净台面、操作者手等进行适当灭菌处理，继续接种。（3）培养：培养物置于25℃左右的培养室中，每天光照12小时，光照度为850-1200lx。（4）观察：定期观察培养物的生长情况，及时将污染材料取出。四、作业1、总结本实验外植体的消毒过程及关键步骤。2、进行试验结果的观测、比较和记录，并通过分析筛选出月季无性系建立的最佳培养基配方。植物生长调节剂No.接种数/个萌芽数/个污染

7、数/个萌芽率/%芽生长情况6-BANAAIBACK0010.50.121.00.132.00.241.00.252.00.2（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）