水蛭素说课材料.ppt

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1、水蛭素2精制将粗品A和B分别溶于250和200ml蒸馏水中，各装入已捡漏的透析袋(析袋MW值为6000)，扎紧上口，放置有蒸馏水的烧杯中，4度冰箱放置，每隔8小时换水，连续透析48h，取出透析袋，水液减压浓缩蒸压干燥得纯化样品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收率1.4％。（按书上介绍;A的收率应为0.104％，B收率为0.0825％)3精制将粗品A和B分别溶于250和200ml蒸馏水中，各装入已捡漏的透析袋内(透析袋MW值为6000)，扎紧上口，放置有蒸馏水的烧杯中，4度冰箱放置，每隔8小时换水，连续透析48h，取出透析

2、袋，水液减压浓缩蒸压干燥得纯化样品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收率1.4％。(按书上介绍;A的收率应为0.104％，B收率为0.0825％)（得到的A为深棕色粉末状固体，B的颜色比A要淡也为棕色固体;)，(起始时配置的水蛭样品与生理盐水比例越高最后得到的A和B的颜色越深)4水蛭样品与生理盐水1:5和1:15得到的最后产物A的图片5电泳时溶液的配置（1）0.005MTris—Hcl溶液（pH=8.8）：称取0.06055gTris溶于50mL水，用2N盐酸调pH至8.8，定容至100mL。（2）分离胶缓冲液（pH=8.

3、9）：称取36.3gTris溶于60mL双蒸水中，用2N盐酸调pH至8.9，再用双蒸水定容至100mL，4°C保存备用。（3）单体贮液：称取30g丙烯酰胺和0.8g甲叉双丙烯酰胺，先用70mL双蒸水溶解，再用双蒸水定容至100mL，过滤后用棕色瓶装，于4°C下保存备用。（4）电极缓冲液：称0.6gTris和2.88g甘氨酸溶于双蒸水，调pH至8.3，定容至1000mL。（5）10%过硫酸铵溶液：称取1g过硫酸铵溶于10mL双蒸水中，使用前现配。（6）浓缩胶缓冲液：称6.06gTris溶于60mL双蒸水中，调pH至6.8，再用双蒸水定容至100mL

4、，于4°C下保存备用。（7）0.0252%七水硫酸亚铁溶液：称0.0252g七水硫酸亚铁溶于100mL双蒸水中即可。6胶的制作（制作分离胶5%）1.分离胶缓冲液：10毫升2.单体贮液：21.36毫升3.双蒸水：48.66毫升4.TEMED:150毫升5.过硫酸铵：150毫升7制作浓缩胶(3%)1.浓缩胶缓冲液：2.5毫升2.单体贮液：2.76毫升3.双蒸水：14.68毫升4.TEMED:10毫升5.过硫酸铵：60毫升8用两块普通玻璃作为制备板框的材料。大小为23×23×0.3cm的方形玻璃一块，23×23×0.3cm的凹型玻璃一块。9点样：先将提

5、取的A和B溶解在含有7.5％可溶性淀粉的双蒸水中，取20uL样品点样，marker的尺度为3到10不连续电泳：电泳开始前，加0.2%溴酚蓝作指示剂。采用不连续电泳，初始电压为161V，电流为32mA，时间1小时35分钟，当溴酚蓝通过浓缩胶与分离胶界面时，立即将电压升高至200V，电流为32mA，时间1小时35分钟，时间为4小时30分钟，待溴酚蓝电泳至凝胶底部时，电泳结束，电泳时间约6小时。10染色考马斯亮蓝G250：20mg溶于10ml95％乙醇，加入20ml磷酸，用双蒸水定容至200ml，定容前用玻璃棒搅溶。（在恒温箱中染色20分钟）11脱色2

6、5％甲醇，7.5％乙酸，室温振摇下脱色，总共配置200ml。1213总结1.在进行水蛭粉末获取时，是否直接将整个水蛭搅碎就能使用了。2.当抽干仪温度为52度会不会改变水蛭素的性质3.在水液减压浓缩蒸压干燥得纯化样品A和B时，应用小离心管或称量纸收集精品A和B4.点样时加可溶性淀粉对水蛭素的水性溶是否有影响5.在下次点样时取大于0.20克的A和B充分溶于蒸馏水，并取上清进行点样。此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢