畜肉及内脏中异丙嗪的测定BJS 202005.pdf

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1、食品补充检验方法犅犑犛２０２００５畜肉及内脏中异丙嗪的测定２０２０１１１９发布国家市场监督管理总局发布犅犑犛２０２００５畜肉及内脏中异丙嗪的测定１范围本方法规定了畜肉及内脏中异丙嗪残留量的液相色谱串联质谱测定方法。本方法适用于猪、牛、羊肌肉组织及内脏中异丙嗪的定性确证和定量测定。２原理用酸化乙腈提取畜类肌肉组织和内脏中的异丙嗪，提取液经涡漩、超声、离心、净化后用液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。３试剂和材料除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯，水应为符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。３．１试剂３．１．１甲醇

2、（ＣＨ３ＯＨ）：色谱纯。３．１．２乙腈（ＣＨ３ＣＮ）：色谱纯。３．１．３甲酸（ＨＣＯＯＨ）：色谱纯。３．１．４无水乙醚（Ｃ４Ｈ１０Ｏ）。３．１．５异丙醇（Ｃ３Ｈ８Ｏ）。３．１．６乙腈（ＣＨ３ＣＮ）。３．２试剂的配制３．２．１酸化乙腈溶液（０．１＋９９．９）（体积比）：移取甲酸（３．１．３）１ｍＬ，加乙腈（３．１．６）稀释至１０００ｍＬ，混匀。３．２．２甲酸溶液（０．１＋９９．９）（体积比）：移取甲酸（３．１．３）１ｍＬ，加水稀释至１０００ｍＬ，混匀。３．２．３甲醇甲酸溶液（５＋９５）（体积比）：移取甲醇（３．１．１）５ｍ

3、Ｌ，加甲酸溶液（３．２．２）９５ｍＬ，定容１００ｍＬ，混匀。３．３标准品盐酸异丙嗪标准品的中文名称、英文名称、ＣＡＳ号、分子式、相对分子质量及结构式参见附录Ａ中表Ａ．１，纯度≥９８％。３．４标准溶液的配制３．４．１标准储备液（１００μｇ／ｍＬ）：准确称取标准品（３．３），折算成异丙嗪１０ｍｇ（精确至０．０００１ｇ），置于２５ｍＬ烧杯中，用适量的甲醇（３．１．１）溶解，转移至１００ｍＬ容量瓶中，并用甲醇定容，摇匀，配制成质量浓度为１００μｇ／ｍＬ标准储备液。置－１８℃以下冰箱中保存，有效期６个月。３．４．２标准中间液（１．

4、００μｇ／ｍＬ）：移取标准储备液（３．４．１）１．００ｍＬ，置１００ｍＬ容量瓶中，用甲醇１犅犑犛２０２００５（３．１．１）定容，摇匀，配制成质量浓度为１．００μｇ／ｍＬ标准中间液。置于－１８℃保存，有效期３个月。３．４．３标准工作液（１００ｎｇ／ｍＬ）：移取标准中间液（３．４．２）１０．００ｍＬ，置１００ｍＬ容量瓶中，用甲醇（３．１．１）定容，摇匀，配制成质量浓度为１００ｎｇ／ｍＬ标准工作液。置于－１８℃保存，有效期１个月。３．５材料３．５．１ＳＰＥ小柱：ＯａｓｉｓＨＬＢ柱，６０ｍｇ／３ｍＬ，或性能相当者。３．５．２滤器

5、：０．２２μｍ滤膜。４仪器和设备４．１液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ＥＳＩ）。４．２超声波清洗器。４．３高速冷冻离心机：转速≥１００００ｒ／ｍｉｎ。４．４旋转蒸发仪。４．５固相萃取装置。４．６涡漩混合器。４．７氮气吹干仪。４．８电子天平：感量分别为０．０１ｇ和０．０００１ｇ。４．９组织研磨仪。５测定步骤５．１试样的制备与保存取供试肌肉或内脏组织，研磨、混匀得到试样，－１８℃以下保存。５．２试样的处理５．２．１提取称取试样２ｇ（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入酸化乙腈溶液（３．２．１）１０ｍＬ，加盖后涡漩

6、２ｍｉｎ，超声提取１５ｍｉｎ，４℃以下１００００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液倒入鸡心瓶中。残渣中再加入酸化乙腈溶液（３．２．１）１０ｍＬ，重复提取一次，合并上清液，加５ｍＬ异丙醇（３．１．５）于鸡心瓶中，４０℃减压旋蒸至近干，加５ｍＬ水复溶，３ｍＬ无水乙醚（３．１．４），除脂，涡漩，弃去上层有机溶液，待净化。５．２．２净化净化柱使用前依次用３ｍＬ甲醇（３．１．１）和３ｍＬ水活化，保持柱体湿润。取２．５ｍＬ上述待净化溶液于ＳＰＥ小柱（３．５．１）中，流速控制在１ｍＬ／ｍｉｎ内，用３ｍＬ水淋洗小柱，弃去全部流出液，最后用５

7、ｍＬ甲醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液在４０℃以下氮气吹至干，加入甲醇甲酸溶液（３．２．３）１．００ｍＬ，涡漩０．５ｍｉｎ，过０．２２μｍ滤膜，供测定。５．３标准工作溶液的制备称取阴性试样２ｇ（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，分别吸取异丙嗪标准工作液（３．４．３）１０．０μＬ、２０．０μＬ、４０．０μＬ、１００μＬ、２００μＬ、４００μＬ于对应离心管中，按５．２步骤处理试样，使其上机浓度为０．５００ｎｇ／ｍＬ、１．００ｎｇ／ｍＬ、２．００ｎｇ／ｍＬ、５．００ｎｇ／ｍＬ、１０．０ｎｇ／ｍＬ、２０．０ｎｇ／ｍＬ，供液相色谱

8、串联质谱２犅犑犛２０２００５测定。注：可根据仪器的灵敏度及样品中待测物的实际含量确定标准系列溶液中异丙嗪的质量浓度。５．４液相色谱串联质谱测定５．４．１液相色谱参考条件：ａ）色谱柱：Ｃ１８色谱柱（２．１ｍｍ×５０ｍｍ，１．８μｍ），或性能相当者。ｂ）流动相：Ａ：甲酸溶液（３．２．２），Ｂ：乙腈（３．１．２），梯度洗