食品微生物检验的试剂及配制.ppt

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1、9/4/2021-page1h:marcoindustryFoodmedial了解染色的基本原理。l掌握常用染料的性质及其染色的配制技术。l熟悉常用试剂、缓冲溶液、物质的量浓度的配制技术。l了解培养基的种类及一些常见培养基的用途，掌握一般培养基的配制技术。9/4/2021-page2h:marcoindustryFoodmedia一、染色原理微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的。物理因素：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素：正负离子之间的相互吸引等。9/4/2021-pag

2、e3h:marcoindustryFoodmedia染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型：1.酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑、苦味酸等。2.碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。3.中性（复合）染料：如伊红美兰等，瑞脱氏（Wright）染料和基姆萨氏（Gimsa）染料等（常用于细胞核染色）。4.单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类（Sudanb)的染料9/4/2021-page4h:marc

3、oindustryFoodmedia染色细菌标本检查法－－染料细菌染色用的染料Ø酸性染料（阴离子染料）：染色离子带阴电荷，能与带阳电的物质结合，使之着色。降低菌液的pH而使细菌带阳电时，就可用酸性染料染色。（伊红、刚果红）Ø碱性染料（阳离子染料）：与带负电的物质结合，细菌一般带负电，所以细菌染色所用的染料，常用碱性染料（碱性复红、美蓝）。Ø复合染料：碱性染料与酸性染料的结合物（伊红美蓝、伊红天青）。Ø单纯染料：不能与被染物生成盐类碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋电质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱

4、酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等)使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料．如伊红美蓝、伊红天青等。9/4/2021-page7h:marcoindustryFoodmedial1.常用染料的溶解度表3-1l2.常用染料的配制9/4/2021-page8h:marcoindustryFoodmedia一、缓冲液

5、的配制技术9/4/2021-page9h:marcoindustryFoodmedial1.溶液浓度表示法l2.物质的量浓度溶液的配制方法l3.溶液浓度的调整l4.常用酸碱的物质的量浓度计算9/4/2021-page10h:marcoindustryFoodmedia9/4/2021-page11h:marcoindustryFoodmedial血清学实验在第五章讲解9/4/2021-page12h:marcoindustryFoodmedial什么是微生物生化试验?l指通过利用生物化学的方法来测定微生物

6、的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。ll由于细菌各自酶系统不同，新陈代谢的产物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的细菌。9/4/2021-page13h:marcoindustryFoodmedia1.在培养物中加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的pH值变化。2.在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。3.根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。4.根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长

7、情况。l1.待检菌应是新鲜培养物。培养18-24h。l2.待检菌应是纯种培养物。l3.遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。l4.应做必要的对照试验。l5.提高阳性检出率，至少挑取2-3个待检的疑似菌落分别进行试验。9/4/2021-page15h:marcoindustryFoodmedial生化试验分类l（一）糖（醇）类代谢试验l（二）氨基酸和蛋白质代谢试验l（三）有机酸盐和铵盐代谢试验l（四）酶类试验9/4/2021-page16h:marcoindustryFoodmedia（一）糖（醇）类

8、代谢试验1.糖醇类发酵试验2.V-P试验3.甲基红（MethylRed）试验MR1.糖醇类发酵试验原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇，有的只能分解1~2种糖醇，有的分解糖醇能产酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，根据这