蛋白质分子量的测定ppt课件.ppt

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1、第四章蛋白质的共价结构主要内容1、蛋白质通论2、肽3、蛋白质一级结构的测定4、蛋白质的氨基酸序列与生物功能第四章蛋白质的共价结构（一）蛋白质的化学组成蛋白质是一类含氮有机化合物，除含有碳、氢、氧外，还有氮和少量的硫。某些蛋白质还含有其他一些元素，主要是磷、铁、碘、碘、锌和铜等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为：碳50％氢7％氧23％氮16%硫0—3％其他微量4.1蛋白质通论蛋白质的含氮量蛋白质中氮占生物组织中所有含氮物质的绝大部分。因此，可以将生物组织的含氮量近似地看作蛋白质的含氮量。由于大多数蛋白质的含氮量接近于16%，所以，可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量：蛋

2、白质含量（克%）=每克生物样品中含氮的克数6.254.1蛋白质通论蛋白质的分类组成上分：单纯蛋白质、缀合蛋白质。功能上分：酶、调节蛋白、转运蛋白、贮存蛋白等9类。形状上分：纤维蛋白、球蛋白、膜蛋白。4.1蛋白质通论（二）蛋白质的大小蛋白质是相对分子量很大的生物分子。对任一种给定的蛋白质来说，它的所有分子在氨基酸的组成和顺序以及肽链的长度方面都应该是相同的，即所谓均一的蛋白质。4.1蛋白质通论蛋白质分子量的上下限是人为规定的，因为这决定于蛋白质和分子量概念的定义。一般规定最小的蛋白质是胰岛素，相对分子量为5.7K。某些蛋白质是由两个或更多个多肽链通过非共价键结合而成的，称寡聚蛋白质

3、。每条多肽链称为亚基或亚单位。有些寡聚蛋白质的分子量可高达数百万甚至数千万。4.1蛋白质通论（三）蛋白质结构层次4.1蛋白质通论二、肽PEPTIDE4.2肽1、肽与肽键结构蛋白质中氨基酸之间的基本连接为肽键（peptidebond）,除此之外还有二硫键（disulfidebond）。肽键的形成4.2肽1、肽与肽键结构某五肽命名：丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu4.2肽1、肽与肽键结构肽平面（酰胺平面）：由六个原子组成（2Cα、C、H、O、N）C-N具有部分双键性质4.2肽1、肽与肽键结构C-N具有部分双键性质4.2肽2、肽的理化性质□肽晶体的熔点

4、均较高；□肽的酸碱性质主要处决于游离末端α-NH2和α-COOH及侧链R基的可解离功能基团；在长肽上主要是侧链上的；□小肽的滴定曲线与氨基酸相似；□肽的化学反应与氨基酸相似；□双缩脲反应是二个或二个以上肽键化合物所特有的反应；□小肽的旋光度约等于组成氨基酸的旋光度之和；4.2肽双缩脲反应:当脲（即尿素）加热到180℃时，两分子脲缩合，放出一分子氨而形成双缩脲，然后在碱性溶液中与Cu2+结合生成复杂的紫红色化合物。+Cu2+4.2肽3、天然存在的活性肽GSH（谷胱甘肽）GSH可被氧化成GSSGGSH作用：在红细胞中作为巯基缓冲剂存在；维持血红蛋白和其它红细胞蛋白质的半胱氨酸残基处于还

5、原状态。例如，它可防止H2O2将红细胞中血色素的二价铁氧化成三价铁形成高铁血红蛋白。4.2肽短杆菌肽（抗生素）L-Orn—L-Leu—D-Phe—L-Pro—L-Val—L-Orn—L-Leu—D-Phe—L-Pro—L-Val对革兰氏阳性菌有强大抑制作用。见P5324.2肽加压素和催产素两者只差两个氨基酸，但生理作用不同4.2肽甜味素Asp-Phe-OCH3，比蔗糖甜200倍。三、蛋白质一级结构的测定1969年，国际纯粹与应用化学委员会（IUPAC）规定：蛋白质的一级结构指蛋白质多肽连中氨基酸的排列顺序，包括二硫键的位置。其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础

6、。4.3蛋白质一级结构的测定牛胰腺核糖核酸酶A的一级结构4.3蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。氨基酸序列测定有直接法和间接法两种：直接法，用酶和特异性试剂直接作用于蛋白质而测定出氨基酸顺序；间接法，通过测定蛋白质之基因的核苷酸顺序，用遗传密码来推断氨基酸的顺序。这是因为核苷酸的测序比蛋白质的测序工作要更方便、更准确。4.3蛋白质一级结构的测定第一步、前期准备分离纯化蛋白质（纯度>97%以上）蛋白质分子量的测定（电泳法、凝胶过滤法

7、、超离心法等）4.3蛋白质一级结构的测定第二步、多肽链的数目测定与拆分A、测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质摩尔数之间的关系，即可确定多肽链的数目。4.3蛋白质一级结构的测定B.多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。4.3蛋白质一级结构的测定对于借助非共价键连接在一起的几条多肽链，如，四聚体血红蛋白，可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).4.3蛋白质一级结构的测定对于几条多肽链通过