《分解纤维素的微生物的分离》课件1.ppt

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1、3----3分解纤维素的微生物的分离一.基础知识复合C1酶Cx酶葡萄糖苷酶C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶1.纤维素多糖高分子化合物葡糖糖木材作物秸秆棉花过滤纸等含量较多土壤中存在能分解纤维素的微生物能合成纤维素酶3、实验验证纤维素酶的作用①方法：滤纸崩溃法②标准：对产生的葡萄糖进行定量测试试管滤纸条0.1mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液pH＝4.8纤维素酶70～80U/mL条件结果11×6cm10mL1mL两试管固定在50mL锥形瓶中,在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h时间足够长,滤纸被21×6cm11mL基本无变化完全分解2511mmo

2、l4．纤维素分解菌的筛选(1)筛选方法：法。(2)筛选原理：刚果红可以与纤维素形成，当纤维素被分解后，刚果红——纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现，我们可以通过来筛选纤维素分解菌。刚果红染色红色复合物纤维素酶以纤维素分解菌为中心的透明圈是否产生透明圈(3)纤维素分解菌的筛选原理的图示理解此培养基为固体培养基——在其中加入刚果红可形成以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可筛选到纤维素分解菌。即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。1．分离纤维素分解菌的实验设计(1)实验流程：土壤取样→→梯度稀释→将样品涂布到的鉴别培养基上→挑选产生的

3、菌落。二、实验操作选择培养纤维素分解菌透明圈特别提醒(1)本实验方案中应设置普通培养基(或牛肉膏蛋白胨培养基)作为对照实验。(2)分离纤维素分解菌先经选择培养，其目的是增加纤维素分解菌的浓度；然后经梯度稀释后，再涂布到鉴别培养基上。富含纤维素2)选择培养①目的：增加纤维素分解菌的，确保能够从样品中分离到所需要的。②选择培养：称取土样20g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在上，在一定温度下振荡培养1～2d，直至培养液变。也可重复选择培养。浓度微生物摇床混浊筛选过程中涉及的两种培养基(1)纤维素分解菌的选择培养基①配

4、方：组分含量/g提供的主要营养纤维素粉5碳源、能源NaNO31无机盐Na2HPO4·7H2O1.2KH2PO40.9MgSO4·7H2O0.5KCl0.5酵母膏0.5碳源、氮源水解酪素0.5氮源将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mLP29纤维素分解菌的选择培养基中“选择因子”是什么？纤维素粉液体没有添加琼脂成分纤维素粉将纤维素粉改为葡萄糖增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物鉴别纤维素分解菌的培养基配方CMC－Na5～10g酵母膏1gKH2PO40.25g琼脂15g土豆汁100mL将上述物质溶解后，用蒸馏水定容

5、到1000mL固体琼脂羧甲基纤维素钠碳源刚果红纤维素分解纤维素酶透明圈（3）挑选菌落a．刚果红染色法，挑选的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。b．常用的刚果红染色法包括两种，一种是先，再加入进行反应，另一种是在时就加入刚果红。产生透明圈培养微生物刚果红颜色倒平板c．两种刚果红染色法比较优点显示出颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作简便，不存在菌落混杂问题缺点操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂①由于琼脂、土豆汁中均含有淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假阳性反应；②有些微生物具有降解色素的能力，它们会降解刚果红形成透明

6、圈，与纤维素分解菌不易区分3．课题延伸(1)为确定得到的透明圈中的菌落是纤维素分解菌，需要进行的实验，纤维素酶的发酵方法有和两种。(2)纤维素酶的测定方法一般采用。发酵产纤维素酶液体发酵固体发酵对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定由“选择培养”实验操作过程请你推测纤维素分解菌的异化类型是需氧型还是厌氧型？需氧型。【例1】下列关于分离纤维素分解菌实验的叙述，错误的是()。A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B．选择培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少C．经稀释培养后，用刚果红染色D．对照组可用同样量的培养

7、液涂布到不含纤维素的培养基上答案A【例2】微生物体内能够使纤维素分解成纤维二糖的酶是()。A．C1酶和Cx酶B．C1酶和葡萄糖苷酶C．Cx酶和葡萄糖苷酶D．C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶答案A旁栏思考题1．本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？答案本实验流程与课题2的流程的区别如下：课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。2．为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？答案由于生物与环境的相互依存关系

8、，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对较高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。3．将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？答案将滤纸埋在