血库实验室技术.ppt

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1、血库实验室技术武威市中心血站岳文清血库实验室技术一、实验操作的一般原则二、常用红细胞血清学技术三、血清学检测的注意事项四、实验室工作的几点体会一、实验操作的一般原则（一）.使用商品化试剂前，必须认真阅读试剂使用说明书；（二）.所有的实验过程必须严格遵循实验室所制定的标准操作规程进行，任何人员不得随意更改步骤；（三）.实验所用的试管及玻片都应清洁（最好不要重复使用），并且做好明确清楚的标记；（四）.在实验过程中应先加血清，并检查确认每个试管，再加入细胞；一、实验操作的一般原则（五）.判读结果时，应该先判读对照管，只有在对照管结果符合

2、预期结果时，才可进一步判读试验结果；（六）.判读结果时，要对实验结果进行逐一判断，不要多个试管同时进行；（七）.要完整记录所有的试验现象，如抗体鉴定中的溶血；（八）.及时记录实验结果，不要凭记忆补做记录；一、实验操作的一般原则（九）.在记录实验结果时注意阴、阳性的书写，以避免书写不清楚发生混淆，而导致的最终结果的错报；★建议对阳性结果用繁体字“陽”字记录；阴性结果应记录“阴”或“O”；（十）.在正确完整的记录了所有的结果后，才能对实验结果进行分析说明；（十一）.在实验记录单上应标明：试剂的厂家、批号、实验日期、室内质控结果、实验操

3、作者及复核者；一、实验操作的一般原则（十二）.实验全过程中应避免样本间的交叉污染；（十三）.操作过程中，严格按照实验室生物安全的相关要求做好个人防护；（十四）.不合格标本不能接受做血型定型和交叉配血试验。二、常用的红细胞血清学技术（一）红细胞血清学的免疫学基础（二）标本（三）盐水介质凝集试验（四）胶体介质凝集试验（五）酶处理细胞的凝集试验（六）抗球蛋白试验（七）微柱凝胶试验（八）聚凝胺的运用（九）抗体效价滴定（十）吸收放散试验（十一）凝集抑制试验（十二）新生儿溶血病的免疫学检查（十三）免疫性溶血病输血反应的调查二、常用的红细胞血清

4、学技术（一）红细胞血清学的免疫学基础--凝集反应1.凝集反应定义2.凝集反应的两个阶段3.凝集反应的特点1.凝集反应定义细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。抗原抗原排斥抗原抗体凝集反应抗原抗原抗原2.凝集反应的两个阶段第一阶段：抗原抗体的特异性结合；第二阶段：出现肉眼可见的凝集现象。3.凝集反应的特点⑴Z电位：颗粒性抗原表面双层离子云所形成的电位差。抗原抗体特异性互补结合时，抗体桥联作用克

5、服Z电位而使颗粒聚集在一起。⑵IgM类抗体：完全抗体，分子量大，抗体桥联作用足以克服Z电位，使颗粒聚集在一起；⑶IgG类抗体：不完全抗体，分子量小，抗体桥联作用不足以克服Z电位，颗粒不能聚集；3.凝集反应的特点⑷在实验时，为促使凝集现象的出现，可采取以下措施：a.加电解质或蛋白质，降低离子强度缩短颗粒间的距离；b.加入右旋糖苷或葡聚糖，增加试验溶液的粘滞度；c.用胰酶或神经氨酸酶处理，改变表面结构；d.以离心方法克服颗粒间的排斥力等。二、常用的红细胞血清学技术（一）红细胞血清学的免疫学基础（二）标本（三）盐水介质凝集试验（四）胶体

6、介质凝集试验（五）酶处理细胞的凝集试验（六）抗球蛋白试验（七）微柱凝胶试验（八）聚凝胺的运用（九）抗体效价滴定（十）吸收放散试验（十一）凝集抑制试验（十二）新生儿溶血病的免疫学检查（十三）免疫性溶血病输血反应的调查二、常用的红细胞血清学技术（二）标本：1.血样的采集2.红细胞悬液的配制3.标本的保存1.血样的采集⑴.红细胞标本：作为抗原的红细胞标本，可用末梢血，直接用生理盐水配制成悬液；在多数情况下是静脉采血，用ACD或CPD血液保存液抗凝，或乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）抗凝，血液与保存液之比为4:1，每毫升血用5%的Na

7、2-EDTA0.1ml。★用于抗球蛋白试验的红细胞标本要抗凝，原因为：不抗凝标本在温度较低的情况下，自身冷抗体会与红细胞作用，活化补体，使红细胞上结合有C3b和C4b，造成抗球蛋白试验的假阳性。1.血样的采集⑵.血清标本：取静脉血慢慢注入干燥管内，置37℃恒温箱，待凝固后用玻璃棒搅动血块，使之与管壁剥离，然后置4℃过夜、离心分离血清。必要时血液凝固后即离心分离血清，但分出的血清较少，同时也没有4℃过夜吸收冷自身抗体的作用。★需要补体参与的血清学试验，要用新鲜血清，或添加新鲜AB型血清作为补体来源；而有些试验用的血清或做试剂用的血清

8、则要经56℃30min灭活补体后使用。★一般试验避免使用血浆，防止纤维蛋白原的干扰。2.红细胞悬液的配制⑴.用于血型鉴定、交叉配血的红细胞至少要用大量的生理盐水洗一遍，通过洗涤可以去除吸附在红细胞表面的血型物质、血浆蛋白质、抗凝剂等成分。⑵.配制悬