最新酶堥析 - 酶学分析技术10课件ppt.ppt

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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你看热的

2、，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅酶堥析-酶学分析技术10本章内容概要：第一节酶活性测定的基本知识第二节

3、酶活性测定方法及酶学分析的类型第三节同工酶测定第四节酶学分析在临床诊断上的应用第五节酶活性测定最适条件的选择1、掌握酶活性的国际单位定义，酶活性浓度的表示方法及酶活性单位的计算公式；酶活性测定的连续监测法和定时法的概念、区别和结果的计算方法；酶偶联反应的在酶活性测定和酶法分析代谢物中的应用；以NAD（P）H为指示系统和色素原底物在酶活性测定中的应用.本章教学要求：2、熟悉酶促反应进程；酶促反应底物动力学；酶学分析在临床诊断上的应用。3、了解Km值、Vmax值的应用及Km和Vmax的测定；同工酶测定和酶活性测定最适条件的选择。三

4、、酶活性单位的计算步骤：运用公式进行计算。明确测定方法的酶单位定义，按照酶单位定义确定物质量、体积和时间的单位，计算公式:产物的增加量每单位规定的保温时间1000（ml）酶单位/升=—————————×——————————×————————每单位规定的产物增加量实际保温时间实际标本用量（ml）分光光度法测定的公式：（A测定–A对照）·V总·106每单位规定的保温时间酶单位/升=—————————×————————·L·V标实际保温时间四、酶促反应进程酶促反应进程曲线酶量的测定：通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确测定

5、酶量，应使酶浓度（〔E〕）与酶促反应速度成正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速度，即酶促反应初速度。酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应速度才能准确代表酶活性。酶的含量酶活性酶促反应初速度五、酶促反应底物动力学中间产物学说：酶促反应进行时，酶首先与底物结合为中间产物，然后再催化底物反应生成产物。E+SES→E+P米-曼氏方程：Vmax〔S〕v=—————〔S〕+Km上式中v代表反应速度，Vmax代表最大反应速度，〔S〕代表底物浓度，Km称为米氏常数。（

6、一）米氏常数的定义由米-曼氏方程可以导出：（Vmax-v）〔S〕Km=———————v当v=1/2Vmax时，Km=〔S〕。因此Km值为反应速度相当于最大反应速度一半时的底物浓度。Km值是酶的特征常数，具有重要的应用价值。（二）Km值的应用1.鉴定酶的种类Km值是酶的特征常数，在反应条件一定时，只与酶的种类和底物的性质有关，与酶的浓度无关。不同种类的酶其Km值不同，对于一种未知的酶，可在规定的条件下测定其Km值加以鉴定。表7-1某些酶的Km值酶底物Km(mmol/L)乳酸脱氢酶丙酮酸0.017己糖激酶D-葡萄糖0.05D-果糖

7、1.5-半乳糖苷酶D-乳糖4.0碳酸酐酶H2CO39.0过氧化氢酶H2O225蔗糖酶蔗糖28糜蛋白酶甘氨酰酪氨酰甘氨酸1082.反映酶与底物的亲合力Km值越大，酶与底物亲合力越小，Km值越小，酶与底物亲合力越大。3.选择酶的最适底物Km值取决于酶的种类和底物的性质，在酶一定时，不同底物有不同的Km值。酶活力测定时，应优先选择酶的最适底物，使酶促反应容易进行，并节省底物用量。4.计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最大反应速度的比率根据米-曼氏方程可以计算5.设计适宜的底物浓度酶促反应进程曲线表明，只有初速度才能真正代表酶活性

8、，一般要求初速度达到最大速度的90%～95%、底物消耗率为1%～5%。这样既可以近似地表示酶活性，又不致于使底物浓度过高而造成浪费。(三)Vmax的应用定义：Vmax指酶完全被底物分子饱和时的反应速度。应用：Vmax可用来计算酶的转化率（TN），即单位时间内每分子酶可使底物发