临床生物化学和生物化学检验06.pptx

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1、第六章诊断酶学P136-176蚌埠医学院生化与分子生物学教研室1教学目标[教学时数]6学时[掌握]血清酶的分类、生理变异、病生机制等,同工酶及其亚型测定,临床诊断中常用的血清酶及其同工酶,重要血清酶的测定、原理及评价。[熟悉]酶的有关酶基本知识,酶活性浓度的测定技术及酶的免疫化学测定。2第一节血清酶3一、血清酶的来源根据酶的来源及其在血浆中发挥催化功能的情况,将其分为:P143一般代谢酶组织专一酶血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶细胞酶一般代谢酶组织专一酶血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶细胞酶血清酶4名称血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶细胞酶一般代谢酶组织专一酶来源肝消化

2、腺或其它外分泌腺各组织器官(无器官专一性)肝(有器官专一性)种类凝血酶原、Ⅹ因子、Ⅻ因子、纤溶酶原、ChE、CER、LCAT、脂蛋白脂肪酶等胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶、ACP、ALP等LDH、AST、ALT、CK、MDH等OCT等5二、血清酶的去路酶蛋白在血管内的失活与降解(主要代谢去路)血清酶的半寿期(T1/2):酶失活至原来活性一半所需时间。有助于了解同一疾病不同酶升高持续时间的差异。肝或网状内皮系统对血清酶的清除少数以酶原形式存在的血清酶类(凝血酶原、纤溶酶原)在活化后迅速被肝清除,网状内皮系统也可能参与血清酶(LD、AST、AMY、CK等)的清除。血清酶

3、的排泄尿路是血清中低分子量酶的重要排泄途径,如胃蛋白酶原、淀粉酶(AMY)。转入其它体液只有血清酶的来源与去路保持平衡,才能维持酶活性保持相对恒定。但一些病理情况往往促使这种平衡被打破,导致血清酶活性的变化。P1436三、血清酶变化的病理机制(一)合成异常合成减少合成增多肝损害导致合成酶的能力受损(ChE、LCAT)酶基因变异引起酶合成减少(铜氧化酶)增生性疾病(骨骼疾病,ALP)恶性肿瘤(前列腺癌,ACP)酶的诱导作用(乙醇,γ-GT)P1447(二)释放增加(大多数血清酶增高的主要机制)细胞内外酶浓度的差异对于非血浆特异酶,细胞内外浓度差可在千倍以上,只要有少

4、量细胞坏死或病变,血中酶浓度明显升高。对血浆特异酶,细胞病变很少引起血中酶浓度明显升高。酶的相对分子量(影响细胞内释出的关键)酶从细胞内释出的速度与酶的相对分子量成反比。如AMI时,血中最先升高的是CK(MW:85kD),LD(MW:125kD)出现升高明显延迟。酶的组织分布含酶量高且血流丰富的组织器官,其细胞内酶进入血流的可能性大;除少数组织专一性酶以外,大多数血清酶不能特异反映某个特定组织的病变。但同工酶的发现大大提高酶检测的组织的特异性。酶在细胞内的定位及存在形式线粒体酶不易从细胞中释出,如ASTm的检测往往反映肝细胞的损伤程度,且是AMI中最后升高的酶,用

5、于判断预后;有些酶在细胞内与结构蛋白结合,较难释放。ATPATP不足,细胞内酶容易释放。P1458(三)排出异常肾功能减退,血清AMY活性升高可能因酶排泄障碍而在血液中滞留。胆道梗阻,血清ALP升高的原因是梗阻区ALP合成加强,ALP排泄受阻而逆流入血。大多数酶,不存在以上的清除机制。P1459四、血清酶的生理差异(一)性别多数酶无差异,少数有差异男性高于女性:CK、ALP、γ-GT女性高于男性:LDH1(青年妇女)(二)年龄最明显的例子是ALP,新生儿血清中ALP略高于成人,1~5岁增至成人的2~3倍,然后逐渐下降,到10~15岁,ALP又明显升高,可达成人的3

6、~5倍,20岁后降至成人值。(三)饮食血清中大多数酶不受进食影响,故测定酶活性不一定需要空腹采血。(四)运动激烈的肌肉运动可使血清中多种酶,如CK、LD、AST、ALD、ALT等活性升高。(五)妊娠(六)其它P14510第二节酶活性浓度的测定技术P146-P16011酶活性浓度的测定技术酶活性浓度概念酶活性浓度测定连续监测法检测酶活性浓度工具酶血清酶活性浓度测定条件的优化酶活性浓度的单位12一、酶活性浓度的概念1.酶的特性:微量性、高效性等。直接测量非常困难(mmol/L或mg/dl)通过测定被加速化学反应的反应速率,来间接反映酶的浓度2.酶促反应SSEE+ESE

7、PE+PV=dsdt或V=dpdtES133.酶活性浓度即酶所催化的化学反应的反应速率,用酶促反应中单位时间内底物的减少量或产物的生成量来计算。注意:只有当酶所催化的反应速度仅与[E]成正比,而不受其它因素影响时,即在酶促反应的零级期,才能根据酶所催化的化学反应速率来确切表示酶活性浓度的大小。P14614实际上是通过检测酶活性浓度间接反映酶的量,因为直接检测酶的质量浓度要求的实验条件及技术条件非常高,价格昂贵,不适用于临床检测,因此测定酶活性浓度是临床酶学分析最为常见的方法,具有迅速、灵敏、成本低等特点。但仅在上述前提下,只能在反应的零级期,即只有在酶促反应的最适

8、条件下,才

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