“预培养”那些事.docx

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1、“预培养”那些事微生物研究院作者▏半知菌目编辑 ▏中仑原创版权，请勿转载一、预培养的由来中国药典自2010年版起，在药品微生物实验室质量管理指导原则中第一次提出：用于环境监控的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养，以防止外来的污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。2015年版中国药典出版后，在四部“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”中，这句话再次出现。必须说明的是，中国药典这段关于环境监测培养基的要求，是出自：USP1117〈MICROBIO

2、LOGICALBESTLABORATORYPRACTICES〉Specialcareshouldbetakenwithmediathatisusedinsterilitytests(see SterilityTests 71 forrequirements)andinenvironmentalmonitoringstudies.Mediausedforenvironmentalmonitoringofcriticalareasshouldpreferablybedouble-wrappedandterminallyste

3、rilized.Ifterminalsterilizationisnotperformed,mediashouldbesubjectedto100%pre-incubationandinspectionbeforeusewithinacriticalarea.[NOTE—Growth-promotiontestingforthismediamustbeperformedafterthepreincubationstage.]Thiswillpreventextraneouscontaminationfrombeingca

4、rriedintocontrolledenvironmentsandwillpreventfalse-positiveresults.二、预培养的目的之所以对环境微生物监测培养基，特别是对关键区域环境监测培养基提出特别的要求，特别是对关键区域环境监测培养基提出特别的要求，其主要目的就是要避免环境微生物监测的培养基及培养基的传递过程对关键区域，主要是A级、B级洁净区造成污染或交叉污染，从风险评估的角度讲，就是要避免环境微生物监测出现假阴性或假阳性的结果。药企实验室为环境微生物监测自行配制的培养基，在配制过程中可能会有个别培

5、养基平板受到污染而染菌，所以就采用了“预培养”，期望通过“预培养”后发现的菌落，最终剔除部分染菌的培养基平板。风险评估整个预培养的过程，就会发现如下两个风险：1.预培养所设定的培养条件，培养温度和培养时间适合污染菌的生长吗？2.污染的微生物可以通过目视而被挑选出来吗？答案当然是否定的。在不了解污染菌的情况下，设定一个培养条件，试图发现制备培养基过程的污染菌是不现实的。而对于生长缓慢的微生物，或者菌落没有超过肉眼分辨率的个别污染菌，试图通过目检也是无法判断培养基是否染菌的。三、预培养的风险分析从中国药典和USP对环境监测培

6、养基的质量控制中明显看得出，中国药典之环境微生物监测培养基的要求基本是翻译了USP的章节。但是有一个很大的差别，USP文中有关键的一句［NOTE：Growth-Promotiontestingforthismediamustbeperformedafterthepre-incubationstage.］（预培养之后的培养基必须做促生长试验），中国药典没有。这样在环境微生物监测培养基，可能会留下来一个潜在的隐患：假阴性结果。也就是说，中国药典在环境监测的培养基的质量控制方面，忽略了预培养过程对培养基营养成分，水分等损耗给培

7、养基带来的质量隐患，给环境微生物监测结果带来的“假阴性”的可能。假阴性，这一微生物检验中最大的风险，没有提及。再分析一下，假阳性可以预防吗？目前国内企业环境监测培养基通常的做法是，实验室自己配制培养基，倒平板，预培养，挑选后冷藏保存，直至使用。仔细考量这个环节，存在诸多的风险点：第一：预培养的条件如何确定？第二：挑选这一过程不可能发现所有长菌的平板。第三：挑选平板的过程，也存在污染或交叉污染的可能。如发现已污染的培养基平板，GMP的要求是走偏差或OOS的流程，而不是仅仅去除染菌的，剩下的继续使用。第四：预培养过程，对培养

8、基而言就是一个营养消耗的过程，预培养后，在没有确认培养基的促生长性能之前就使用，存在假阴性风险。对“预培养”的正确理解：1、预培养只能部分的发现培养基染菌，不能保证无菌。2、预培养是双刃剑，在消除“假阳性”的同时，引入了“假阴性”的可能。3、预培养只能部分的发现培养基染菌，不能保证无菌。