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《海洋寡糖工程药物——壳寡糖制备分离新工艺及其抗癌活性研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、海洋寡糖工程药物——壳寡糖制备分离新工艺及其抗癌活性研究垦煎生叠堂壁查生旦塑文章绾号:1006—376X(2001)02-0006—03海洋寡糖工程药物一ChineJour【ofMieroecology,February200l【述评】壳寡糖制备分离新工艺及其抗癌活性研究杜昱光,张铭俊,张虎,白雪芳(中国科学院大连化学物理研究所,辽宁大连116023)摘要:以梅洋甲壳多糖为原料,研究了酶法解钳备壳寡糖的方法.通=吐对专一性和非专一性障解用爵的筛选,确定以壳聚糖酶或6036酶为降解酶;考察了底物浓度,酶量,温度,pH,溶解舟质等因素对障解反应的髟响;
2、提出了反应与分离相耦合制备壳寡塘的新构思{在此基础上进行了扩大试验,确毫L了谆=吐程实现工业化生产的可行性,对所生产壳寡塘的抑瘤活性研究证明一定结构的壳寡塘具有很好的生钉括性,具有开发抗肿瘤药物前景.美量词:壳寡糖制备壳聚塘酶;膜分离耦合;抗癌括性.中图分类号:Q5柚文献标识码:A壳寡糖是指2～10个氨基葡萄糖以9-1,4-糖苷键连接而成的低聚糖,它通常是由甲壳翥(虾,蟹壳等)脱乙酰化的产物壳聚糖的降解而获得.我国海岸线漫长,甲壳素资源十分丰富,目前每年生产约2000～3000吨,因此,它的开发利用具有十分重要的意义.壳寡糖具有多种优异的生理功能,
3、它能提高机体的免疫能力和抗癌能力J,改善肠道微生物的区系分布,刺激有益茁的生长,还可作为植物功能i胃节剂,刺激植物生长],增强植物对病虫害的防御能力].本工作是在国家科委"九五"攻关项目酵法生产低聚糖"及农韭部"948引进项目的资助下完成,主要研究工作如下:1壳聚糖降解用一的筛选爱白僵苗的诱变选育考察壳聚糖酶和脂肪酶,纤维索酶,菠萝蛋白酶,溶茁酶,6036酶对壳聚糖的降解括性,表明这6种酶都是以内切方式切断糖苷键的.其中壳聚糖酵和6036酶降解壳聚糖可得到较高聚合度的寡糖.而且还原糖的液度和牯度下降的百分率较高(表1).因而被确定为降解用酶.对产壳
4、聚糖酵的白僵茁进行了紫外诱变,获得了两株高产酶的突变株,其活力比文献报道的同类茁高出s0倍,经6代传代,表明有较好的稳定性.表1各种一降解壳聚糖粘度下降百分率处理酶粘度下舜百舟串()脂肪酶纤维素酶壳聚糖酶6036酶菠萝蛋白酶藩菌酶704l763294.6593.3290.362壳聚糖一降解特性的研究21壳聚糖和6036酶降并反应的动力学研究表明两种酵降解反应符舍米氏方程VS/(+S)计算出相应的动力学参数6036酵一=0448g/min-LK=0.732g/L壳寡糖酶一=0.3634g/min?LK=0679g/L2.26036酶对壳聚糖的降解特性
5、研完.观察底物的浓度收稿日期:200~,0918(囤2),醇用量,温度(囤3),pH(囤4)和溶解舟质(袁2)对降解反应的影响.表2溶解介质的选择O5101520裱物浓度s/t圈1雇物浓度对酶活影聃010203040506070T(℃)田2温度对一活的影聃l23{5678】田3pH对一活的影聃¨0i}E:一EL‰llzgL害蔓硅¨¨0呲¨.∽EE日∞p.g目螺溢6中国傲生态学杂志2001年2月第13卷第1期ChineseIourr=slofM[~roecolo~v,February2O01,Vol13Nol0.10o8占006no4n020
6、204060瞳4壳聚糖降解产物的洗脱曲线发现底骑浓度低于15g/L时,还原糖浓度随底骑浓度增加而增加.高于15g/L时,还原糖浓度下降.当温度太低时,溶液牯度太大,还原糖浓度较低.温度太高,酶活受到影响.适宜的反应温度是40℃.在低pH条件下.酶的活性受到抑制.而pH在60以上,因壳聚糖部分不溶,pH值选定在4.2～5.6之间较为适宜.考察盐酸,柠檬酸和靖酸对壳聚糖溶解的影响.低温下盐酸不能充分溶解壳聚糖,溶胀后牯跗于器壁上.高温时壳聚糖会部分降解,柠糠酸反应速率较慢.选定醋酸为溶解介质较为适宜此外还考察了酶的圊定化和底物脱乙酰度对壳聚糖降解的影响
7、.2.3探讨白僵蓠对壳聚糖降解的特性结果发现,以白僵茸培养液上清液降解壳聚糖,20h壳聚牯度下降90,降解产物中除单糖,二糖外,还有39的三糖和6的五糖.如用硫酸铵沉淀上清液得到了粗酶,12h底物基本降解完,阵解3h的产物申,四糖,五糖占1O.3降解产物的分析和分离提取31分析测试方法建立时间飞行质谱分析测定壳寡糖聚合度的方法及壳聚糖脱乙酰化度和产物中还原糖浓度的测定方法.3.2壳囊糖降解产转乙酰化产物的分离由于阵解产物中有多种部分乙酰化的寡糖,很难用色谱法将其分离,将阵解产物乙酰化,得到相应聚合度的几丁寡糖.再用阳离子交换树脂或活性发柱色谱将其分
8、离,得到克级的纯品,在50cm长的甩离子交换树指柱分离的洗脱曲线如图5.4提高和控制壳聚糖聚台度的研究许多研究表明,聚合度
