血友病研究的进展.doc

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1、血友病研究的进展标签：血友病治疗病毒出血患者   血友病是由于遗传性凝血因子VIII（FVIII）和IX（FIX）基因缺陷，造成血浆FVIII和FIX含量不足或功能缺陷，引起的一组终生出血的凝血障碍性疾病，包括血友病A（FVIII缺乏）和血友病B（FIX缺乏），属X性联隐性遗传性疾病。西方国家血友病患病率为5-10/10万人口，我国2.73/10万人口。自70年代以来，随着有效的替代治疗，血友病致残率与死亡率大大降低，发达国家血友病患者的寿命已从50年代的平均10岁提高到接近正常水平。80年代后，随

2、着病毒灭活技术的不断改进，替代治疗的安全性得到保障，血友病患者感染病毒性肝炎，爱滋病大大降低。进入90年代以来，重组凝血因子的广泛应用，不仅提高疗效，同时避免了传统人源性凝血因子应用后产生抗体与易发生病毒感染的副作用。基因治疗在动物试验中获得成功,在人类的临床初步研究成果为血友病的根治带来曙光。如何进一步降低血友病患者的死亡率，致残率，出生率，提高患者生存质量是目前工作的重要任务。本文仅就血友病近年研究进展进行概述。一．发病机制的研究   FVIII基因定位于Xq28，全长186kb，由26个外显子

3、和25个内含子组成。已发现约300多种基因突变，基因型与表型密切相关。点突变，小的基因缺失引起轻度FVIII缺乏。终止密码子，大的基因缺失，插入，移位，无义突变往往引起严重的FVIII缺乏和临床表型。已证实FVIII22内含子倒位突变引起FVIII严重缺乏是45%的重型血友病A的分子发病机制。最近在1%的重型血友病A中还发现FVIII内含子1倒位突变。  二．基因诊断：确定致病基因；用于携带者检出和产前诊断；并可预测抑制物的产生。   （一）直接基因诊断：采用分子生物学方法(PCR，DGGE，SSC

4、P，DNA测序等)直接测定致病基因的缺陷。FVIII22内含子倒位分析可作为重型HA的筛选试验，也是目前唯一用于临床诊断的直接基因检测方法。FVIII22内含子倒位和其它一些基因突变常伴有抑制物发生，因此有助于预测抑制物的产生。   （二）间接基因诊断：利用致病基因内外的限制性片段长度多态性（RFLP）作为特异分子遗传标志物，通过家系成员间的连锁关系确定血友病基因的遗传情况，进行DNA多态性分析的遗传学诊断(RFLP，VNTR，STR等方法)，可使诊断率达99%。RFLP分析的局限性：必须具有先证者

5、的标本；母亲系该多态位点的杂合子，联合多个RFLP才可诊断。   （三）产前诊断：对高危胎儿可在妊9-12周通过绒毛膜活检；妊12-16周进行养水穿刺，近来还可在胚胎植入前通过早期胚胎（8个细胞时）获取胎儿DNA，通过DNA基因型和遗传表型确定胎儿性别，以及进一步判断是否为血友病或携带者。妊18-20周可在胎儿镜下取脐静脉血，测定FVIII:C和FVIII:Ag。上述方法都存在流产的危险（约0.5%-1%）,需在妇产科医生的指导与配合下进行。利用流式细胞术（FACS）测定母体静脉血中的胎儿特异性单克

6、隆抗体以确定胎儿性别，提供了早期，无创性产前诊断的方法。   三．替代治疗：是目前最有效的治疗手段。主张尽早治疗，将凝血因子提高到止血水平，避免出血并发征，防止功能丧失。但目前全世界尚有80%患者没有任何替代治疗。血浆制品的产率仅5%-10%，随血源紧张将越来越匮乏与昂贵。   （一）人FVIII浓缩物：近15年随着病毒灭活技术的改进（干热法-HIV?，有机溶剂加表面活性剂方法-HCV?，二步病毒灭活法-HAV?），血浆筛选的规范化（PCR），血制品的安全性大大提高，血源传播性疾病如肝炎，爱滋病发生

7、率明显降低。中纯度：含FVIII1-3U/mg，每1U/kg可使血浆FVIII水平提高2%，含VWF，也可用于VWD治疗。体内半寿期为8-12小时。副作用：病毒感染，抗FVIII抑制物产生。高浓度：含FVIII50-200U/mg，利用层析技术制备，不含VWF。超高纯度：含FVIII3000U/mg，利用离子交换层析或单克隆抗体技术制备，不含VWF，主要用于FVIII抑制物(中高滴度,10-30BU)的治疗。   （二）重组FVIII浓缩物（rFVIII）：通过基因克隆技术表达，1990年通过美国F

8、DA批准，其生物活性，半寿期与血浆FVIII相似，安全，无病毒污染。但价格昂贵，也可产生抗体。目前在加拿大与爱尔兰几乎所有血友病患者，美国70%以上重型HA采用rFVIII治疗。主要用于重型血友病A和抑制物的治疗。第一代rFVIII（全长FVIII）：利用人体白蛋白作为稳定剂。第二代rFVIII（BDD）：利用蔗糖代替蛋白作为稳定剂，FVIII无B区，但仍保留其活性，生化特性基本同血浆制品。由于不含其他人类蛋白，无免疫活性，更安全，有效。使用BDD时，一期法FVIII